調(diào)節(jié)致密斑細胞表達COX-2的信號傳導(dǎo)通路及環(huán)孢霉素A影響COX-2表達的相關(guān)機制研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文調(diào)節(jié)致密斑細胞表達COX2的信號傳導(dǎo)通路及環(huán)孢霉素A影響COX2表達的相關(guān)機制研究姓名：劉冬妍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科腎臟病學(xué)指導(dǎo)教師：李學(xué)旺20050401中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博上研究生論文中文摘要背景高血壓的發(fā)生、發(fā)展與水鹽代謝紊亂密切相關(guān)，腎小球旁器在腎臟調(diào)節(jié)水鹽代謝過程中占有重要的作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)在哺乳動物腎臟，PGE2在致密斑(maculadensa，M功細胞調(diào)節(jié)腎素分泌的作用中

2、占有舉足輕重的位置。在以往的研究中，不少學(xué)者已證實鹽攝入的減少和腎臟灌注壓的降低都能引起腎臟MD和近皮質(zhì)的髓袢升枝粗段(corticalthickascendinglimb，cTALH)細胞COX一2表達增加。而這兩種實驗條件都可能導(dǎo)致臨近MD的腎小管管腔內(nèi)NaCI濃度降低，為此有理由認(rèn)為COX2可能參與腎血管阻力的調(diào)控及MD細胞對腎素分泌的調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)COX2基因轉(zhuǎn)錄的信號傳導(dǎo)通路、順式作用元件很多，但是關(guān)于這方面的研究多集中在參與炎癥

3、反應(yīng)的細胞和腫瘤細胞，而在MD細胞中的相關(guān)研究并不多見。CsA能抑制腎臟COX2表達，CsA對腎臟的損害是否與這些作用有關(guān)值得進一步探討。本研究目的是探討低鹽刺激對腎臟MD細胞COX2表達的影響。觀察參與COX2轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的MAPK信號傳導(dǎo)通路，首次用瞬時轉(zhuǎn)染的方法研究MD細胞AP一1、NFAT、NF心的轉(zhuǎn)錄活性，以及c—Jun、cFos、NFAT蛋白的表達，并探討CsA對COX2表達的可能影響機制。方法本研究選用SD大鼠和MMDDl細胞

4、株分別進行體內(nèi)及體外研究。即：1SD大鼠隨機分為8組，每組8只：1正常鹽飲食msl；2NSCsA(15mg／d／kg)；3NSCele(塞來昔布，40mg／d／kg)；4NSCsACclc；5低鹽飲食(003％NaCl，LS)；6LSCsA；7LSCele：8LSCsACele。7天后手術(shù)取動物標(biāo)本，用RTPCR方法檢測腎臟皮質(zhì)COX2、腎素mRNA表達，用免疫印跡方法分析各組皮質(zhì)COX2蛋白表達，對組織切片進行COX2免疫組化染色。2

5、低鹽00wsalt，LS)培養(yǎng)MMDDl細胞，在有／無CsA作用下，用RTPCR和免疫印跡方法分析其COX2的表達。用ELISA方法分析正常鹽(no瑚alsalt，Ns)與LS培養(yǎng)對MMDDI細胞PGE2分泌的影響。用免疫印跡檢測MMDDl細胞pp38、pErk和pJNK的變化。3MMDDl細胞經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染含NF—KB、AP1、NFAT的熒光素酶報告質(zhì)粒，采用瞬時表達方法檢測LS／LSCsA培養(yǎng)對NF—rJ3、AP1、NFAT轉(zhuǎn)錄活性的