‘平潭水仙’β-葡萄糖苷酶與揮發(fā)性芳香物質(zhì)形成關(guān)系的研究.pdf

1、在‘平潭水仙’開花過程中，本研究利用HS-SPME-GC-MS分離分析技術(shù)，結(jié)合保留值、內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行了揮發(fā)性芳香物質(zhì)定性定量分析；利用XAD-2樹脂吸附法以及有機(jī)溶劑成功分離了游離態(tài)、鍵合態(tài)芳香組分，并在外源β-葡萄糖苷酶的水解作用釋放了鍵合態(tài)芳香物質(zhì)，檢測到了揮發(fā)性芳香物質(zhì)；同時利用丙酮粉法研究了β-葡萄糖苷酶活性變化趨勢，并克隆分離了四個β-葡萄糖苷酶基因家族成員和一個芳樟醇合成酶基因家族成員，進(jìn)行了熒光定量表達(dá)分析，所得主要結(jié)果如下

2、：
　　1.1、‘平潭水仙’不同時期揮發(fā)性物質(zhì)分析
　　自水培之日(0d)起至現(xiàn)綠色花苞(19d)，‘平潭水仙’均未釋放揮發(fā)性物質(zhì)，隨著花苞轉(zhuǎn)白到完全綻放，揮發(fā)性物質(zhì)種類及含量隨之不斷增多，后伴隨著花的衰老，揮發(fā)性物質(zhì)也相應(yīng)減少。‘平潭水仙’花主要的揮發(fā)性物質(zhì)是萜烯類、醇類、酯類，以Z-羅勒烯、芳樟醇、乙酸苯甲酯、別羅勒烯為主，其中芳樟醇是貢獻(xiàn)最大的特性香氣組分，其次為羅勒烯，兩組分均隨著花的盛開，含量顯著增加，進(jìn)入衰老期又

3、急劇降低。
　　1.2、‘平潭水仙’不同時期游離態(tài)、鍵合態(tài)芳香物質(zhì)分析
　　在‘平潭水仙’花盛開過程中，19d的綠芽雖未檢測到太多的游離態(tài)芳香物質(zhì)，卻富含較多的鍵合態(tài)芳香物質(zhì)；隨著花的盛開，游離態(tài)的芳香物質(zhì)組分增多，鍵合態(tài)芳香物質(zhì)較少；進(jìn)入衰老期游離態(tài)芳香物質(zhì)減少而鍵合態(tài)芳香物質(zhì)變多。
　　1.3、‘平潭水仙’不同時期β-葡萄糖苷酶活性變化
　　隨著花的盛開，酶活顯著提高至27d達(dá)到最大值，伴著花的衰老酶活又逐漸

4、降低。β-葡萄糖苷酶活性的動態(tài)變化趨勢與‘平潭水仙’揮發(fā)性芳香物質(zhì)的變化趨勢一致，初步推測了β-葡萄糖苷酶與‘平潭水仙’揮發(fā)性芳香物質(zhì)形成的關(guān)系，即隨著花的盛開，初期貯存的鍵合態(tài)芳香物質(zhì)在逐漸提高活性的β-葡萄糖苷酶的水解糖苷鍵作用下，不斷釋放出具有芳香物質(zhì)的配基，增加了花的游離態(tài)芳香物質(zhì)，從而增加了水仙花的香味，后伴隨著花的衰老，酶活性降低，水解糖苷鍵的作用減弱，芳香物質(zhì)多以鍵合態(tài)的形式存在，致衰老過程中花的揮發(fā)性芳香物質(zhì)也隨之減少。

5、
　　1.4、β-葡萄糖苷酶基因家族成員、芳樟醇合成酶基因克隆和表達(dá)分析
　　本研究嘗試克隆β-葡萄糖苷酶基因家族成員和芳樟醇合成酶基因，成功克隆了3個(Nt-BGLⅠ-1、Nt-BGLⅠ-2、Nt-BGLⅠ-3)屬于糖基水解酶家族1的β-葡萄糖苷酶基因家族成員和1個(Nt-BGLⅢ-1)屬于糖基水解酶家族3的β-葡萄糖苷酶基因家族成員，核酸序列長度在1665~2155bp，編碼區(qū)為1464~1878bp，編碼487~652

6、個氨基酸，5’UTR序列長度均比3’UTR短；克隆分離出一條芳樟醇合成酶基因(Nt-Lis I)，全長為1668bp，開放閱讀框(ORF)大小為1575bp，編碼524個氨基酸，有一個DDXXD基序，無RRx8W基序，可能屬于TPSg家族成員。根據(jù)實(shí)時熒光定量分析結(jié)果推測主要由Nt-BGL I-1、Nt-BGL I-3參與了‘平潭水仙’揮發(fā)性芳香物質(zhì)形成過程，Nt-BGL I-2、Nt-BGLⅢ-1參與了β-葡萄糖苷酶其他生理代謝；萜類