Lewis y抗原增強人卵巢癌細胞系RMG-I表面CD44介導(dǎo)的粘附和鋪展作用.pdf

1、前言：卵巢癌在婦科惡性腫瘤中病死率居首位,卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機制一直是婦科腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究探索的重點,了解卵巢癌生物學行為的控制方法及發(fā)生發(fā)展的分子機制對于卵巢癌的預(yù)防及治療十分重要。
　　 卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展是一個極其復(fù)雜的多因素的過程,目前對其發(fā)生機理尚不清楚。近年來,糖復(fù)合物和腫瘤的關(guān)系受到廣泛關(guān)注。糖復(fù)合物是細胞膜的重要組成部分,對細胞-細胞、細胞-分子的識別十分重要,參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子粘附等分子相互作用,與細胞生長、凋

2、亡、運動、分化等生命過程密切相關(guān)。細胞癌變后細胞膜上的糖復(fù)合物,特別是其糖鏈部分發(fā)生結(jié)構(gòu)和量的變化。卵巢癌主要表現(xiàn)為Ⅱ型糖鏈的改變,如Lewisy抗原。研究表明75％的上皮性卵巢癌出現(xiàn)Lewisy不同程度的過量表達,且增高的患者預(yù)后不良。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)α1,2-FT基因轉(zhuǎn)染后的人卵巢癌細胞系RMG-I-H與轉(zhuǎn)染前的細胞系RMG-I相比,出現(xiàn)了癌相關(guān)抗原Lewisy的高表達。通過比較兩細胞系生物學行為的特征,證明基因轉(zhuǎn)染后細胞系的增

3、殖能力加強,粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移等能力增強,提示Lewisy抗原在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中有重要作用。
　　 CD44是細胞表面粘附分子的重要組成部分,參與腫瘤細胞的粘附和轉(zhuǎn)移,在腫瘤發(fā)展過程中具有重要作用,但其調(diào)節(jié)機制尚不十分清楚。CD44分子結(jié)構(gòu)中富含α-L-巖藻糖,是細胞表面含有α1,2-巖藻糖抗原結(jié)構(gòu)的重要蛋白質(zhì)之一。CD44表達于多種組織細胞表面,與細胞外基質(zhì)中的透明質(zhì)酸(hyaluronan,HA)、層粘連蛋白等

4、受體結(jié)合,介導(dǎo)細胞-細胞、細胞-基質(zhì)的粘附作用。本實驗主要在前期工作的基礎(chǔ)上,利用已經(jīng)建立的α1,2-FT及Lewisy穩(wěn)定高表達細胞模型,研究α1,2-FT基因轉(zhuǎn)染對細胞表面CD44表達的影響,并探討Lewisy抗原對CD44介導(dǎo)的細胞粘附和鋪展作用的影響,為研究卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機制奠定基礎(chǔ),為卵巢癌的早期診斷及靶器官治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、利用免疫細胞化學方法比較抗Lewisy單克隆抗體阻斷前后細

5、胞系RMG-I和RMG-I-H CD44的表達情況。
　　 2、利用Western Blot方法檢測RMG-I和RMG-I-H細胞中Lewisy抗原與CD44的表達。
　　 3、利用免疫共沉淀方法和激光共聚焦檢測Lewisy抗原與CD44的結(jié)構(gòu)關(guān)系。
　　 4、從細胞形態(tài)學方面觀察抗Lewisy單克隆抗體阻斷前后兩種細胞系對HA的粘附、鋪展能力。
　　 5、利用Real-time PCR方法檢測CD44

6、mRNA在RMG-I和RMG-I-H細胞中的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫細胞化學結(jié)果顯示RMG-I-H細胞中CD44的表達明顯高于RMG-I細胞,用Lewisy單克隆抗體預(yù)先處理后,上述兩種細胞的CD44表達均顯著下降。
　　 2、Western Blot方法證實,RMG-I-H細胞中CD44的含量是RMG-I細胞中的1.46倍。
　　 3、Lewisy抗原能與CD44分子共定位表達,兩者發(fā)生免疫