卵巢癌細(xì)胞系RMG-Ⅰ Lewis（y）抗原含量變化影響其對(duì)卡鉑的耐藥性.pdf

1、卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)腫瘤之一，發(fā)病率雖低于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌居第三位，死亡率卻為婦科惡性腫瘤之首。主要原因之一是術(shù)后復(fù)發(fā)。70％患者在術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)，五年生存率僅為20～30％。腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性及耐藥性是決定術(shù)后復(fù)發(fā)的主要因素，并與患者的預(yù)后顯著相關(guān)。所以明確耐藥的原因?qū)槁殉舶┗煼桨傅倪x擇提供理論依據(jù)，最終提高患者的五年生存率。 在前期研究中發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞系RMG-I轉(zhuǎn)染α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因后，細(xì)胞表面Lew

2、is(y)抗原含量增加，細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為增強(qiáng)，同時(shí)對(duì)化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的耐藥性明顯增強(qiáng)。細(xì)胞表面Lewis(y)抗原含量與卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)耐藥性是否有關(guān)，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，而鉑類(lèi)是目前卵巢癌化療中應(yīng)用最多的藥物。本次實(shí)驗(yàn)，以轉(zhuǎn)染α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因后的Lewis(y)抗原穩(wěn)定高表達(dá)卵巢癌細(xì)胞株RMG-I-H及其對(duì)照組RMG-I、RMG-I-C作為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究?xì)胞表面Lewis(y)抗原含量變化與細(xì)胞對(duì)卡鉑

3、耐藥性的關(guān)系。 材料與方法: 1、卵巢癌細(xì)胞株 RMG-I，RMG-I-C和RMG-I-H由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科教研室林蓓教授提供。RMG-I-H和RMG-I-C分別為上皮性卵巢癌細(xì)胞株RMG-I穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)載體pcDNA3-1(-)-HFUT-H(含α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因)及空載體pcDNA3.1得到的細(xì)胞株。設(shè)RMG-I-H為實(shí)驗(yàn)組，RMG-I及RMG-I-C為對(duì)照組。 2、四甲基偶氮唑

4、鹽(MTT)檢測(cè) 取指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)24h。實(shí)驗(yàn)組加入工作濃度卡鉑，同時(shí)設(shè)定陰性對(duì)照和空白對(duì)照。培養(yǎng)72h。于終止前4h，每孔加入20μl MTT(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)。4h后棄上清，每孔加入150μl DMSO，水平震蕩10min，于490nm波長(zhǎng)處測(cè)各孔OD值。取30μg/ml，60μg/ml兩個(gè)濃度，分別在24h、48h、72h、96h、120h5個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。計(jì)算各時(shí)點(diǎn)IR值。 3、流式細(xì)胞儀

5、(FCM)檢測(cè) 取指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于25cm<'2>的培養(yǎng)瓶中。實(shí)驗(yàn)組加入卡鉑使其終濃度分別為30μg/ml，60μg/ml，另設(shè)陰性對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)72h，收集細(xì)胞。按Annexin-V-FICT/PI試劑盒操作說(shuō)明染色，利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。 4、熒光染色法觀察觀察細(xì)胞形態(tài) 取指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，接種于6孔板。實(shí)驗(yàn)組加入卡鉑，使其終濃度分別為30μg/ml，60μg/ml，另設(shè)陰性對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)72h，染色