卵巢癌細胞系RMG-Ⅰ Lewis（y）抗原含量變化影響其對卡鉑的耐藥性.pdf

1、卵巢癌是女性生殖器官常見腫瘤之一，發(fā)病率雖低于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌居第三位，死亡率卻為婦科惡性腫瘤之首。主要原因之一是術(shù)后復發(fā)。70％患者在術(shù)后2年內(nèi)復發(fā)，五年生存率僅為20～30％。腫瘤對化療藥物的敏感性及耐藥性是決定術(shù)后復發(fā)的主要因素，并與患者的預后顯著相關(guān)。所以明確耐藥的原因?qū)槁殉舶┗煼桨傅倪x擇提供理論依據(jù)，最終提高患者的五年生存率。 在前期研究中發(fā)現(xiàn)卵巢癌細胞系RMG-I轉(zhuǎn)染α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因后，細胞表面Lew

2、is(y)抗原含量增加，細胞的惡性生物學行為增強，同時對化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的耐藥性明顯增強。細胞表面Lewis(y)抗原含量與卵巢癌細胞對鉑類耐藥性是否有關(guān)，國內(nèi)外尚未見文獻報道，而鉑類是目前卵巢癌化療中應用最多的藥物。本次實驗，以轉(zhuǎn)染α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因后的Lewis(y)抗原穩(wěn)定高表達卵巢癌細胞株RMG-I-H及其對照組RMG-I、RMG-I-C作為體外實驗模型，研究細胞表面Lewis(y)抗原含量變化與細胞對卡鉑

3、耐藥性的關(guān)系。 材料與方法: 1、卵巢癌細胞株 RMG-I，RMG-I-C和RMG-I-H由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科教研室林蓓教授提供。RMG-I-H和RMG-I-C分別為上皮性卵巢癌細胞株RMG-I穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達載體pcDNA3-1(-)-HFUT-H(含α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因)及空載體pcDNA3.1得到的細胞株。設RMG-I-H為實驗組，RMG-I及RMG-I-C為對照組。 2、四甲基偶氮唑

4、鹽(MTT)檢測 取指數(shù)生長期細胞，常規(guī)培養(yǎng)24h。實驗組加入工作濃度卡鉑，同時設定陰性對照和空白對照。培養(yǎng)72h。于終止前4h，每孔加入20μl MTT(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)。4h后棄上清，每孔加入150μl DMSO，水平震蕩10min，于490nm波長處測各孔OD值。取30μg/ml，60μg/ml兩個濃度，分別在24h、48h、72h、96h、120h5個時間點重復上述實驗。計算各時點IR值。 3、流式細胞儀

5、(FCM)檢測 取指數(shù)生長期細胞接種于25cm<'2>的培養(yǎng)瓶中。實驗組加入卡鉑使其終濃度分別為30μg/ml，60μg/ml，另設陰性對照組，繼續(xù)培養(yǎng)72h，收集細胞。按Annexin-V-FICT/PI試劑盒操作說明染色，利用流式細胞儀進行檢測。 4、熒光染色法觀察觀察細胞形態(tài) 取指數(shù)生長期細胞，接種于6孔板。實驗組加入卡鉑，使其終濃度分別為30μg/ml，60μg/ml，另設陰性對照組，繼續(xù)培養(yǎng)72h，染色