苦參素誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞系HO-8910細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：腫瘤的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，其治療方法目前也是通過抑制腫瘤增殖率來達(dá)到治療腫瘤的目的。細(xì)胞凋亡理論的提出及在近十年內(nèi)該領(lǐng)域突飛猛進(jìn)的進(jìn)展，無疑提供了一個(gè)全新的角度去考察腫瘤的形成及其治療策略。越來越多的資料表明，細(xì)胞凋亡失衡是腫瘤形成及發(fā)展的重要原因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是治療腫瘤的一條嶄新并且有效的途徑。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，抗腫瘤藥物正是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤活性的。深入研究腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，凋亡相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控等課

2、題將為開發(fā)新型抗癌藥以直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的凋亡療法奠定堅(jiān)實(shí)的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?；谏鲜稣J(rèn)識(shí)，本研究使用苦參素作用于體外培養(yǎng)的國(guó)內(nèi)自行建系的人卵巢癌細(xì)胞系HO-8910，以探討苦參素是否通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤活性。 方法：應(yīng)用不同濃度苦參素處理HO-8910細(xì)胞，與作用的不同時(shí)間收集細(xì)胞，分別做如下觀察：細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)(MTT還原法)、倒置顯微鏡觀察活細(xì)胞、Giemsa染色觀察細(xì)胞形態(tài)改變并計(jì)數(shù)凋亡率、透射電鏡觀察凋

3、亡細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)、瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA降解情況。 結(jié)果：1.MTT還原法結(jié)果顯示，苦參素在體外明顯抑制HO-8910細(xì)胞增殖，以2mg/ml以上作用更為顯著，呈現(xiàn)明顯的作用時(shí)間和劑量依賴關(guān)系。 2.苦參素誘導(dǎo)過程中凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 2.1 2mg/ml、8mg/ml苦參素作用24h、48h后，將培養(yǎng)瓶置倒置顯微鏡下，原附壁生長(zhǎng)的細(xì)胞失去彼此連接，收縮變圓，細(xì)胞輪廊更加清晰，細(xì)胞附壁能力減弱，易從培養(yǎng)瓶壁上脫

4、落下來。 2.2 細(xì)胞涂片Giemsa染色后，高倍鏡下見到細(xì)胞體積縮小、有完整的細(xì)胞膜、染色質(zhì)濃縮、凋亡小體形成。 2.3 透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞并可見線粒體變性。3.細(xì)胞DNA電泳情況 3.經(jīng)過2mg/ml、8mg/ml苦參素分別作用24h、48h后，抽提細(xì)胞DNA進(jìn)行電泳則呈現(xiàn)梯狀電泳模式。說明苦參素作用后激活了細(xì)胞的核酸內(nèi)切酶，降解DNA形成了180～200bp整數(shù)倍的核苷酸片段。常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)

5、胞抽提DNA電泳后在加樣孔附近有一清晰的條帶。 4.苦參素誘導(dǎo)過程中凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)情況凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，同一濃度下，隨著苦參素與細(xì)胞孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P＜0.05)；孵育相同時(shí)間，高濃度苦參素組比低濃度苦參素組凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)升高(P＜0.05)。表明苦參素誘導(dǎo)HO-8910細(xì)胞凋亡呈藥物濃度依賴性和藥物作用時(shí)間依賴性。在8mg/ml苦參素作用50h后，細(xì)胞片狀壞死增多，無法區(qū)分凋亡細(xì)胞。 結(jié)論：1.苦