人甲狀旁腺激素1-34對牙本質(zhì)形成和礦化影響的實驗研究.pdf

1、甲狀旁腺激素(Parathyroidhormone，PTH)是一種調(diào)節(jié)血鈣并使其維持在正常水平的重要激素類物質(zhì)，PTH1-34是其主要降解產(chǎn)物，具有PTH的全部生物學活性。研究表明：PTH可以影響成牙本質(zhì)細胞的前體細胞(牙乳頭間充質(zhì)細胞和/或牙髓細胞)的分化和功能，在一定程度上影響牙本質(zhì)形成和礦化，但是其影響是通過直接作用于成牙本質(zhì)細胞分化、牙本質(zhì)基質(zhì)形成和礦化，還是通過調(diào)節(jié)血漿鈣磷濃度間接影響牙齒發(fā)育，還有待于研究。本研究在以往研究的

2、基礎(chǔ)上，從動物和細胞水平進一步探討PTH影響牙本質(zhì)形成和礦化的機制。 目的觀察hPTH1-34(humanParathyroidhormone1-34)對牙本質(zhì)的形成和礦化的影響；以及觀察hPTH1-34對PTH/PTHrP受體(Parathyroidhormone/ParathyroidhormonerelatedproteinReceptor)mRNA在人牙髓細胞中的表達的影響，探討PTH影響牙本質(zhì)形成和礦化的機制。方法1.

3、切除大鼠甲狀旁腺后，建立牙本質(zhì)發(fā)育不全的動物模型，再人工給予不同劑量的hPTH1-34，檢測血鈣水平的變化，6周后處死大鼠，取下頜切牙制作切片，HE染色，光鏡觀察并進行圖像分析；2.選用培養(yǎng)的第四代牙髓細胞分為兩組，實驗組培養(yǎng)基加入hPTH1-34，調(diào)整終濃度為33.3nmol/L，在其培養(yǎng)的第5，10，15，20天提取總RNA，以RNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成cDNA，加入特異引物進行PCR擴增，同時擴增β-肌動蛋白的cDNA作為半

4、定量RT-PCR的內(nèi)參照，對PCR產(chǎn)物進行半定量分析。結(jié)果1.切除了甲狀旁腺的大鼠血鈣水平下降，牙本質(zhì)礦化缺陷，在給予hPTH1-34皮下注射后可以檢測到血鈣水平上調(diào)，光鏡觀察和圖像分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)牙本質(zhì)的形成和礦化發(fā)生逆轉(zhuǎn)，10nmol/kg組和20mmol/kg組作用效果優(yōu)于5nmol/kg組(P＜0.05)。2.在人牙髓細胞培養(yǎng)的5d，10d，對照組和實驗組的PTH/PTHrP受體mRNA水平均較低，10d以后PTH/PTHrP受體m