TIPS術(shù)中膽汁漏出對其再狹窄的影響.pdf

1、第一部分:TIPS動物(豬)模型的建立與組織學(xué)特征;目的:建立在組織病理學(xué)方面與人體相似的TIPS動物模型是研究TIPS再狹窄機(jī)制的重要步驟,但是,目前尚無有關(guān)TIPS動物模型的組織學(xué)特征的專題研究.因此,該研究將系統(tǒng)地評估有關(guān)TIPS豬模型的組織學(xué)特征.材料與方法:用20只健康家豬建立TIPS模型,2-16天分別處死.所有動物在放置支架后和處死前分別進(jìn)行門靜脈造影.并分別從支架的門靜脈段,肝靜脈段及支架中段取標(biāo)本作改良Giemsa染色

2、.并用用冰凍切片免疫組化染色(抗平滑肌細(xì)胞(SMC)α膠原染色)甄別SMC.采用電子面板標(biāo)準(zhǔn)面積計(jì)算技術(shù)對再狹窄增殖組織作定量分析.第二部分:TIPS術(shù)中膽汁漏出:動物實(shí)驗(yàn)研究;目的:評價(jià)TIPS動物模型中膽道損傷并膽汁漏出極其對支架再狹窄的影響.材料與方法:用45只豬建立TIPS模型,術(shù)后處死時(shí)間為10-16天,觀察指標(biāo):分流道通暢率,支架內(nèi)膽汁漏出染色,分流道內(nèi)增生狹窄的定量分析.第三部分:膽汁對豬平滑肌細(xì)胞增殖的影響;目的:研究膽

3、汁對離體SMC培養(yǎng)的直接作用.材料與方法:離體SMC培養(yǎng)分為三組:Ⅰ組=1％血清+1％膽汁;Ⅱ組=10％血清+1％膽汁;Ⅲ組=10％血清.細(xì)胞收獲點(diǎn)分別為3、10、14天.每一收獲點(diǎn)中每組為6個(gè)樣本.檢測指標(biāo)為DNA,總蛋白及DPM(每分鐘[<'3>H]—胸苷衰減量).第四部分:膽汁對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長及功能的影響;目的:通過離體細(xì)胞培養(yǎng)研究膽汁在內(nèi)皮細(xì)胞生長、繁殖過程中的作用,闡明TIPS術(shù)中膽道損傷并膽汁漏出與TIPS術(shù)后支架內(nèi)皮

4、化過程的關(guān)系.為TIPS分流道再狹窄的形成機(jī)制提供新的理論依據(jù),并有助于理解血管內(nèi)和其它腔道放置支架后再狹窄的形成機(jī)制.材料與方法:無菌條件下取健康產(chǎn)婦分娩6小時(shí)臍帶,充分洗滌后,灌注0.1％膠原酶進(jìn)行消化,收集消化液,離心,所獲沉淀即內(nèi)皮細(xì)胞,在含20％新生牛血清及其它輔助因子的的RPMI-1640培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng).短期培養(yǎng)后加入不同濃度的人膽汁,分不加膽汁、含5％、10％、15％、20％及25％膽汁共6組繼續(xù)培養(yǎng),光鏡下觀察培養(yǎng)過程