Derp2 DNA表位疫苗對哮喘小鼠氣道變態(tài)反應炎癥和Toll-9受體的影響.pdf

1、目的:近年來特異性免疫治療被認為是當前哮喘唯一的對因治療方法,但使用的變應原粗浸液成分復雜,很難進行標準化且在治療中易導致IgE介導的過敏反應,限制了變應原浸液在臨床上的使用。有研究報道,編碼屋塵螨Derp2全部基因片段的DNA疫苗能抑制Derp2誘導的小鼠氣道過敏性炎癥。研究還證實DNA疫苗激發(fā)免疫系統(tǒng)的過程與Toll樣受體(TLRs)和CpG基序有關,尤其是通過TLR-9的刺激。本實驗探討了Derp2 DNA表位疫苗即刪除了與IgE

2、表位相關的氨基酸殘基的Derp2 DNA疫苗,是否能抑制屋塵螨Derp2誘發(fā)哮喘小鼠模型的氣道炎癥和對TLR-9表達的影響,并與重組Derp2 DNA疫苗(rDerp2)相比較,為進一步開發(fā)新的、有效的和實用的屋塵螨疫苗提供理論基礎。方法:采用基因重組技術構建Derp2 DNA表位疫苗。將BALB/c小鼠(8周齡,雌性,20—25克)分為4組:哮喘組,rDerp2組,表位疫苗組和對照組。首先分別用PBS,rDerp2,Derp2 DNA

3、表位疫苗免疫小鼠,然后用重組Derp2變應原和屋塵螨提取液加上氫氧化鋁致敏,最后用重組Derp2變應原滴鼻激發(fā)。在最后一次激發(fā)后進行氣道高反應性測定。之后,處死所有小鼠。切取肺用HE染色評估組織的一般形態(tài)和細胞浸潤情況,用western-blot(免疫印跡)和免疫組化的方法檢測肺組織TLR-9的表達。收集外周血用ELISA方法檢測Derp2特異性IgE,IgG1和IgG2a。各組數據均用x±s表示,用SPSS10.0進行單因素方差分析,

4、P<0.05者為差異具有顯著性。結果:(1)小鼠霧化吸入逐漸增加劑量的乙酰膽堿并收集其Penh值,Penh值與氣道高反應呈正相關。結果顯示對照組的Penh值或氣道高反應性隨乙酰膽堿濃度的增加并沒有發(fā)生變化,哮喘組的Penh值比表位疫苗組高,有顯著性差異(P<0.01),即表現(xiàn)出高的氣道反應性,而且rDerp2組的Penh值也比表位疫苗組的Penh值高。(2)肺組織學檢測,哮喘組與表位疫苗組相比,表位疫苗組能有效抑制中央支氣管,肺泡和肺血

5、管周圍的炎性細胞,而且rDerp2組的炎癥浸潤比表位疫苗組嚴重。(3)免疫組化結果顯示,TLR-9在氣道和肺泡位置上表達。表位疫苗組的TLR-9的表達比其他三組顯著增高,免疫印跡實驗結果也證實了這一點。(4)用ELISA法檢測過敏原Derp2特異性IgE,IgGl和IgG2a的水平。表位疫苗免疫小鼠血清中Derp2特異性IgE及IgG1水平明顯降低,與rDerp2組和哮喘組相比有顯著差異(P<0.01),同時表位疫苗免疫小鼠血清中Der