rBlag2-PLGA納米疫苗對(duì)rBlag2誘導(dǎo)的小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)炎癥的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：PLGA是一種新型的藥物載體，用作抗原的載體可以控制抗原的釋放，接種機(jī)體后能誘導(dǎo)持續(xù)的免疫應(yīng)答。蟑螂是最主要的吸入性變應(yīng)原之一。國(guó)外的研究表明，對(duì)蟑螂變應(yīng)原過敏和哮喘的發(fā)病相關(guān)，37％的哮喘兒童和48％的哮喘成人對(duì)蟑螂變應(yīng)原過敏。Blag2是德國(guó)小蠊變應(yīng)原的主要致敏蛋白組分之一，研究發(fā)現(xiàn)Blag2能引起60％-80％的德國(guó)小蠊變應(yīng)原過敏病人的IgE反應(yīng)。本研究通過基因工程表達(dá)與純化重組德國(guó)小蠊Blag2變應(yīng)原，建立重組德國(guó)小蠊Bl

2、ag2變應(yīng)原(rBlag2)誘導(dǎo)的小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)炎癥動(dòng)物模型；在建立rBlag2誘導(dǎo)的小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)炎癥動(dòng)物模型基礎(chǔ)上探討重組德國(guó)小蠊變應(yīng)原Blag2-PLGA納米疫苗對(duì)重組Blag2變應(yīng)原誘導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)性氣道炎癥的免疫保護(hù)作用，探討rBlag2-PLGA納米疫苗在支氣管哮喘抗原特異性免疫治療中的機(jī)制。 內(nèi)容與方法：本研究分二個(gè)部分進(jìn)行：第一部分：在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)Blag2重組蛋白，用鎳親和柱層析法提純重組蛋白；24只B

3、alb/c小鼠隨機(jī)分為德國(guó)小蠊粗浸液組(A組)、德國(guó)小蠊粗浸液+重組Blag2組(B組)、重組Blag2(C組)、陰性對(duì)照組(D組)。分別通過HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-Schiff)觀察小鼠肺部炎癥和粘液分泌；觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)BALF、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子和血清rBlag2特異的IgE、IgG1、IgG2a抗體。 第二部分：在rB

4、lag2對(duì)BALB/c小鼠腹腔致敏后，分別以rBlag2-PLGA、rBlag2、空白納米、PBS皮下注射進(jìn)行治療，然后以rBlag2滴鼻激發(fā)，最后一次激發(fā)48小時(shí)后，處死小鼠，通過HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-Schiff)觀察小鼠肺部炎癥和粘液分泌；觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)BALF、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子和血清rBlag2特異的IgE、IgG1、I

5、gG2a抗體。 結(jié)果：1.成功表達(dá)、純化Blag2重組蛋白；A、B與C組肺部病理改變呈現(xiàn)明顯的變態(tài)反應(yīng)性炎癥；BALF中的細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、EOS計(jì)數(shù)、IL-4，血清抗原特異性IgE抗體、IgG1抗體和脾細(xì)胞分泌IL-4均顯著高于正常組D組(P＜0.01)。 2.rBlag2-PLGA納米治療能有效抑制變應(yīng)原誘導(dǎo)的肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和粘液分泌；降低BALF中IL-4濃度，并有效增加IFN-γ的濃度；抑制抗原特異性Ig