斯鈣素蛋白1(STC-1)在氟中毒大鼠腎臟中的作用及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：對(duì)氟中毒大鼠腎臟中斯鈣素蛋白1（STC1）的蛋白表達(dá)，腎臟組織中的鈣磷含量作出對(duì)比研究，應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)STC1在不同染氟濃度大鼠腎臟中的定位、表達(dá)量，及使用光譜分析的方法檢測(cè)腎組織中鈣磷含量，通過(guò)兩種數(shù)據(jù)的對(duì)比分析，研究STC1在氟中毒腎損傷中是否有毒量關(guān)系及和鈣磷離子的關(guān)系，探討氟中毒腎損傷的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：1選擇SD（Sprague-Dawley）純系成年健康雄性大鼠24只，體重80-110克，飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)鼠

2、籠，按體重隨機(jī)分為四組，每組6只，分別為對(duì)照組（注射生理鹽水）、低染氟組、中染氟組及高染氟組，采用腹腔注射方式，每?jī)扇兆⑸湟淮?，注射劑量分別為：高氟組（注射氟劑量為20mg/kg），中氟組（注射氟劑量為10mg/kg），低氟組（注射氟劑量為5mg/kg），對(duì)照組（注射生理鹽水5ml/kg）。按照無(wú)氟飲食，每日早晚八時(shí)各喂食一次，自由飲水，飼養(yǎng)120天后，觀察大鼠氟斑牙出現(xiàn)情況并分度；股動(dòng)脈放血時(shí)采血，然后用生化分析儀檢測(cè)大鼠腎功能生化指

3、標(biāo)：血清尿素、肌酐；取大鼠尿液測(cè)大鼠尿氟濃度，檢測(cè)氟中毒程度，驗(yàn)證氟中毒大鼠模型建模成功與否。
　　2全部大鼠于染氟120天后采用股動(dòng)脈放血法處死，均由同一術(shù)者完成，左側(cè)腎臟組織10％中性甲醛溶液進(jìn)行固定，右側(cè)腎臟-80°低溫保存待用。右腎使用光譜分析的方法檢測(cè)大鼠新鮮腎組織中鈣磷含量。左腎常規(guī)脫水石臘包埋，制作H-E染色切片及STC1免疫組化切片，光鏡下觀察大鼠腎臟組織病理形態(tài)學(xué)的改變。使用免疫組織化學(xué)方法（Elivision二

4、步法）測(cè)量在不同染氟濃度條件下大鼠腎臟中斯鈣素蛋白1（STC1）的蛋白含量的改變。
　　3運(yùn)用圖像分析技術(shù)對(duì)各已檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)輸入Excel2003軟件，建立數(shù)據(jù)庫(kù)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：1各染氟組大鼠門齒呈不同程度黃白相間的氟斑齒，瓷白色，光澤消失，甚至有牙齒缺損，隨染氟劑量的增加，氟斑牙癥狀加重。腎功能

5、指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)高氟組大鼠血清Urea數(shù)值比對(duì)照組升高，有顯著性差異(PO.05)。各染氟組大鼠尿液氟濃度均比對(duì)照組增多，差異有顯著性(P　　2各組大鼠腎臟組織中鈣含量分別為：對(duì)照組54.8±3.25 ug/g，低氟組68.9±5.60 ug/g，中氟組92.8±2.35 ug

6、/g，高氟組113.2±8.89 ug/g；磷含量分別為：對(duì)照組2.02±0.25 ug/g，低氟組1.75±0.18 ug/g，中氟組2.08±0.15 ug/g，高氟組1.63±0.35 ug/g。各染氟組大鼠腎臟組織中鈣含量均比對(duì)照組增多，差異有顯著性(P

7、低(P>O.05)。
　　3光鏡下觀察H-E染色顯示：對(duì)照組見(jiàn)腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞層次排列有序；低氟組見(jiàn)部分近端腎小管細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，胞漿疏松化，空泡樣變性，細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚有序；中氟組見(jiàn)幾乎所有近端腎小管上皮細(xì)胞都發(fā)生了腫脹，細(xì)胞排列不規(guī)則，部分顆粒樣變性，在部分區(qū)域可見(jiàn)凋亡小體出現(xiàn)，皮質(zhì)帶和腎小囊出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球出現(xiàn)萎縮；高氟組見(jiàn)所有近端腎小管上皮細(xì)胞都發(fā)生了腫脹并伴有壞死，細(xì)胞核消失，細(xì)胞結(jié)構(gòu)崩塌，伴有凋亡小體，

8、皮質(zhì)帶和腎小囊炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加，大量腎小球萎縮。
　　4光鏡下STC1免疫組化顯示：STC1的表達(dá)主要定位于大鼠腎臟的近端腎小管。對(duì)照組大鼠腎臟中偶可見(jiàn)STC1的表達(dá)，但表達(dá)強(qiáng)度和數(shù)量很少，各染氟組均見(jiàn)到不同程度的STC1表達(dá)，且隨著染氟濃度的增加，STC1陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度增強(qiáng)(P

9、5.4%，各染氟組STC1表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞率均比對(duì)照組增多，差異有顯著性(P　　結(jié)論：本研究結(jié)果表明，STC1主要表達(dá)在大鼠腎臟的近端腎小管，STC1在氟中毒大鼠腎臟組織中的表達(dá)均較對(duì)照組增強(qiáng)，且隨著染氟劑量的增加，STC1蛋白的表達(dá)增強(qiáng)；氟中毒可引起腎組織鈣離子含量的升高，且鈣離子含量會(huì)隨著染氟劑量的增加而升高；氟中毒時(shí)腎組織磷離子含