異黃酮對鎘致血管內皮細胞不良效應的干預作用.pdf

1、目的:用體外細胞培養(yǎng)方法觀察鎘對血管內皮細胞的直接效應及其作用機制,并以異黃酮進行干預.為整體研究提供依據(jù),并為鎘接觸人群的防治提供線索.方法:采用ECV 304人臍靜脈內皮細胞株,觀察鎘與異黃酮對血管內皮的直接作用和異黃酮對鎘的效應的干預作用.效應指標包括:(1)細胞毒性:形態(tài)學觀察、細胞相對存活率、細胞膜損傷、細胞內鎘濃度;(2)一氧化氮(NO)合成干擾:培養(yǎng)液中NO濃度、細胞內NOS活性、細胞內eNOS蛋白表達;(3)內皮素-1(

2、ET-1)合成干擾:培養(yǎng)液中ET-1濃度、細胞內ECE-1a mRNA表達;(4)對金屬硫蛋白(MT)合成的影響:細胞內MT mRNA的表達;(5)與雌激素受體(ER)途徑的關系:細胞內ER mRNA和ER蛋白的表達,ER拮抗劑對陽性效應的阻斷作用.結果:鎘對內皮細胞的不良效應:細胞內鎘濃度隨染毒濃度的增加而升高;1~100μmol/L鎘增加內皮細胞間隙,損傷細胞膜,抑制細胞活力并表現(xiàn)出毒物興奮效應;0.1~10μmol/L鎘減少NO量

3、,可能與抑制結構型一氧化氮合酶(cNOS)活性有關,不影響內皮型一氧化氮合酶(eNOS)的含量;上調ECE-1a表達,增加ET-1的含量;上調MT基因表達;上調ER基因表達,不影響ER蛋白的表達,ER拮抗劑不能阻斷鎘的不良效應.異黃酮對內皮細胞的效應:異黃酮不影響細胞活力;0.1~1 μmol/L異黃酮能增強內皮細胞cNOS的活性,增加培養(yǎng)液中NO濃度,不影響eNOS蛋白的含量;1μmol/L異黃酮能增加MT mRNA的表達,金雀異黃酮

4、對MT的誘導表達隨時間增加而增強;不影響ER mRNA和ER蛋白的表達.結論1~100μmol/L鎘破壞內皮細胞結構,0.1~10 μmol/L鎘抑制NO合成,增加ET-1.鎘對血管內皮的效應與ER途徑無明顯關系,鎘對ER mRNA的上調其生物學意義不明.鎘及異黃酮均能誘導內皮細胞MT的表達.異黃酮能增加鎘染毒細胞的相對存活率,可能與異黃酮上調MT mRNA表達有關.異黃酮能逆轉鎘對NO和cNOS的效應.異黃酮對鎘的保護效應與ER途徑有