蛋白酶表達及細胞遷移影響的實驗研究.pdf

1、目的：研究促紅細胞生成素（EPO）聯(lián)合粒細胞集落刺激因子（G-CSF）對大鼠間充質干細胞基質金屬蛋白酶表達及細胞遷移的影響。方法：采用經典的全骨髓貼壁法培養(yǎng)MSC，通過成骨、成脂肪等多向誘導分化以及流式細胞儀分析其表面標記(CD90,CD29,CD34,CD45,CD44)等鑒定MSC 特征；P3 代MSC分別給予不同濃度的EPO、G-CSF及EPO和G-CSF組合，RT-PCR方法檢測MSC MMP和TIMP mRNA的表達。Tran

2、swell和Wound healing 實驗評價細胞的遷移能力。免疫印跡法檢測ERK1/2蛋白的改變。結果：①培養(yǎng)出的P3 代MSC,CD90、CD29 呈陽性，CD34、CD45、CD44 呈陰性，具有成脂肪、成骨等多向分化能力。②不同濃度EPO 作用于MSC12h后，MMP-2的表達較空白對照組明顯增加，以1IU/ml 時表達最強（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達無明顯差異。③不同濃度G-CSF 作用于M

3、SC12h后，MMP-2的表達較空白對照組明顯增加，在1ng/ml 時接近峰值（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達無明顯差異。④給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC12h后，MMP-2的表達均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時表達增強

4、（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達無明顯差異。⑤給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC12h后，間充質干細胞侵襲的數(shù)目均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，在EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時侵襲細胞的數(shù)目最多（P<0.05）。⑥給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（

5、0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC18h后，間充質干細胞遷移的面積均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，在EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時遷移的面積最明顯（P<0.05）。⑦給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC