蛋白酶表達(dá)及細(xì)胞遷移影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究促紅細(xì)胞生成素（EPO）聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）對大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)及細(xì)胞遷移的影響。方法：采用經(jīng)典的全骨髓貼壁法培養(yǎng)MSC，通過成骨、成脂肪等多向誘導(dǎo)分化以及流式細(xì)胞儀分析其表面標(biāo)記(CD90,CD29,CD34,CD45,CD44)等鑒定MSC 特征；P3 代MSC分別給予不同濃度的EPO、G-CSF及EPO和G-CSF組合，RT-PCR方法檢測MSC MMP和TIMP mRNA的表達(dá)。Tran

2、swell和Wound healing 實(shí)驗(yàn)評價(jià)細(xì)胞的遷移能力。免疫印跡法檢測ERK1/2蛋白的改變。結(jié)果：①培養(yǎng)出的P3 代MSC,CD90、CD29 呈陽性，CD34、CD45、CD44 呈陰性，具有成脂肪、成骨等多向分化能力。②不同濃度EPO 作用于MSC12h后，MMP-2的表達(dá)較空白對照組明顯增加，以1IU/ml 時(shí)表達(dá)最強(qiáng)（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)無明顯差異。③不同濃度G-CSF 作用于M

3、SC12h后，MMP-2的表達(dá)較空白對照組明顯增加，在1ng/ml 時(shí)接近峰值（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)無明顯差異。④給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC12h后，MMP-2的表達(dá)均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時(shí)表達(dá)增強(qiáng)

4、（P<0.05），MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)無明顯差異。⑤給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC12h后，間充質(zhì)干細(xì)胞侵襲的數(shù)目均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，在EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時(shí)侵襲細(xì)胞的數(shù)目最多（P<0.05）。⑥給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（

5、0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC18h后，間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的面積均有增加，與空白對照組及單因子組相比較，在EPO 1IU/ml+G-CSF 0.1ng/ml 時(shí)遷移的面積最明顯（P<0.05）。⑦給予EPO（1IU/ml）、G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）及EPO（1IU/ml）和G-CSF（0.1ng/ml、1ng/ml）組合作用于MSC