肥大細胞蛋白酶激活受體表達及功能初探.pdf

1、蛋白酶激活受體(protease activated receptors,PARs)是絲氨酸蛋白酶受體,目前在人和小鼠體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)了四種PARs,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。它們的基因序列于1991、1994、1997和1998年被先后克隆出來。其中PAR-1是凝血酶和胰蛋白酶的受體,PAR-2是胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶的受體,PAR-3是凝血酶受體,PAR-4是凝血酶和胰蛋白酶受體。
　　 很久

2、以來就認識到肥大細胞分泌介質(zhì)參與過敏反應。作為初級效應細胞,肥大細胞既參與急性過敏反應又參與慢性過敏反應。肥大細胞一旦被激活,即釋放其已預先合成的和新產(chǎn)生的介質(zhì)執(zhí)行其生物學功能。這些介質(zhì)包括組胺、肝素、蛋白酶以及一系列的細胞因子如IL-4、IL-5和IL-6等,這些細胞因子可以在生理和病理情況下參與調(diào)節(jié)細胞的生長、分泌和遷移等。
　　 有關(guān)PARs與過敏反應性疾病的研究發(fā)現(xiàn),PARs尤其是PAR-2與過敏反應密切相關(guān)。一些過敏原

3、如塵螨、蟑螂過敏原可以激活PAR-2。但通過疾病動物模型得到的實驗結(jié)果卻不盡相同:有些結(jié)果顯示PAR-2激活引起呼吸道的過敏性炎癥反應,有些則發(fā)現(xiàn)PAR-2的激活在過敏性疾病中起到保護作用。所以有待于進一步深入探討PARs在過敏反應性疾病中的作用。雖然對于參與過敏反應的一些細胞如內(nèi)皮細胞、上皮細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞等的PARs功能已經(jīng)有所了解,然而對過敏性疾病的核心效應細胞-肥大細胞的PARs功能還知之甚少。因此本研究將進

4、一步的探討肥大細胞PARs的功能,為過敏性疾病發(fā)病機制的研究提供實驗數(shù)據(jù)。
　　 一、蛋白酶激活受體在肥大細胞的表達
　　 用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應、流式細胞術(shù)及免疫熒光細胞染色分析方法,在mRNA水平和蛋白水平檢測PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在小鼠肥大細胞MC/9和P815的表達。結(jié)果 小鼠肥大細胞MC/9和P815在mRNA水平和蛋白水平均表達PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。結(jié)論 肥大

5、細胞MC/9和P815表達PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。
　　 二、絲氨酸蛋白酶對肥大細胞IL-4分泌的影響
　　 肥大細胞P815培養(yǎng)后用胰蛋白酶、類胰蛋白酶、凝血酶單獨或與相應抑制劑凝血酶抑制劑、大豆胰蛋白酶抑制劑、α抗胰蛋白酶抑制劑、亮肽素結(jié)合處理肥大細胞,收集上清并用ELISA方法檢測IL-4的水平。結(jié)果:胰蛋白酶和類胰蛋白酶能促進肥大細胞P815分泌IL-4明顯增多(P<0.05)；大豆胰蛋白