CD133陽(yáng)性膠質(zhì)瘤細(xì)胞亞群與膠質(zhì)瘤血管生成關(guān)系的研究.pdf

1、目的：腦膠質(zhì)瘤發(fā)病率約占顱內(nèi)腫瘤的45％，治療以手術(shù)切除為主，輔以放療、化療和免疫治療等其他方法。如何提高術(shù)后治療效果，對(duì)延長(zhǎng)腦膠質(zhì)瘤患者的生存期，提高生存質(zhì)量，以期達(dá)到根治目的有十分重要的意義。 血管發(fā)生對(duì)于腫瘤形成和維持是非常重要的，血管發(fā)生的調(diào)節(jié)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞和新血管系統(tǒng)通過(guò)自分泌和旁分泌的生長(zhǎng)因子相互作用，依賴于血管發(fā)生的惡性膠質(zhì)瘤是高度致死性的癌癥，治療有效性的提高要求我們進(jìn)一步了解促進(jìn)惡性膠

2、質(zhì)瘤血管發(fā)生的分子機(jī)制。對(duì)惡性膠質(zhì)瘤和其它腦癌的最新研究發(fā)現(xiàn)了與普通神經(jīng)干細(xì)胞有共同特性的腫瘤亞群，神經(jīng)膠質(zhì)瘤的關(guān)鍵亞群CD133+細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞有相同的特性，其表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物(包括細(xì)胞表面抗原prominin-1/CD133)，能夠自我更新，形成神經(jīng)球樣的球體和分化成復(fù)雜的神經(jīng)系統(tǒng)家族。由于血管生成在腫瘤形成中是關(guān)鍵一步(血管生成開(kāi)關(guān))，我們從人的膠質(zhì)瘤標(biāo)本中分離出CD133+膠質(zhì)瘤細(xì)胞(以下簡(jiǎn)稱CD133+GC)。研究了CD

3、133+GC是否是通過(guò)促進(jìn)血管發(fā)生進(jìn)而促使腫瘤形成，證實(shí)了CD133+GC與腫瘤增殖和血管生成的關(guān)系。 材料和方法：病人標(biāo)本的收集：病人的活檢標(biāo)本被，這些病人包括初次就診的和惡性膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的，病理結(jié)果來(lái)自于山東省立醫(yī)院病理科。 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定CD133 mRNA在膠質(zhì)瘤組織中心及邊緣區(qū)域的表達(dá)和分布情況，并利用免疫磁珠分選術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分類，通過(guò)細(xì)胞分選，我們把CD133+和CD133-的腫瘤

4、細(xì)胞群分離開(kāi)，短時(shí)間培養(yǎng)后，我們把細(xì)胞植入無(wú)胸腺小鼠的右額葉中，然后，我們收集有變化小鼠的大腦，用福爾馬林固定，石蠟包埋，做成切片，進(jìn)行病理檢查，用CD31標(biāo)記腫瘤細(xì)胞，用Weidner法測(cè)量腫瘤的血管密度。 結(jié)果和討論： 1.分離、提純和培養(yǎng)：中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞表型相似，這已經(jīng)得到確認(rèn)，我們對(duì)來(lái)自患者手術(shù)標(biāo)本的惡性膠質(zhì)瘤組織進(jìn)行短期培養(yǎng)，標(biāo)本通過(guò)皮下或者顱內(nèi)移植到免疫缺陷的小鼠上。人類的腫瘤標(biāo)本正好證實(shí)

5、了人類癌癥的生物學(xué)過(guò)程，而人的膠質(zhì)瘤標(biāo)本大量提純有活力的腫瘤細(xì)胞，我們可以利用干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD133來(lái)選取富含CD133+細(xì)胞群。我們先分解腫瘤，用CD133抗體標(biāo)記，利用MACS進(jìn)行分類，然后，我們分別對(duì)CD133+和CD133-腫瘤細(xì)胞進(jìn)行短期培養(yǎng)。 2.由CD133+GC分化產(chǎn)生的腫瘤有豐富的血管供應(yīng)，更易壞死和出血對(duì)干細(xì)胞樣癌細(xì)胞的最新研究表明腫瘤的來(lái)源可以分成兩類，分別是CD133+和CD133-細(xì)胞。為了研究膠質(zhì)

6、瘤亞群的致瘤能力，我們將CD133-或CD133+的膠質(zhì)瘤細(xì)胞植入無(wú)胸腺裸鼠的右額葉，這些瘤細(xì)胞來(lái)自惡性膠質(zhì)瘤病人標(biāo)本。植入CD133+瘤細(xì)胞的大腦產(chǎn)生的腫瘤血管明顯增多和更易出血，這和植入CD133-瘤細(xì)胞的大腦形成鮮明對(duì)比。對(duì)植入CD133+GC的大腦進(jìn)行病理分析，我們發(fā)現(xiàn)腫瘤巨大，高度增殖，血液供應(yīng)豐富，多發(fā)的壞死和出血。植入CD133-腫瘤細(xì)胞的小鼠全都沒(méi)產(chǎn)生腫瘤。把移植CD133+和CD133-細(xì)胞的大腦進(jìn)行CD31染色并對(duì)比