Orexin A對大鼠下丘腦NPY神經(jīng)元高電壓激活鈣通道電流的影響及機(jī)制.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、Orexin A對NPY神經(jīng)元高電壓激活鈣通道的影響 目的：食欲素(orexins，也稱hypocretins)是近年發(fā)現(xiàn)的由后側(cè)下丘腦(later hypothalamus area，LHA)合成和分泌的一種新的神經(jīng)肽，它包括兩個單體orexin A和orexin B，最初的實驗結(jié)果顯示腦室內(nèi)注射orexin A能明顯增加實驗大鼠的攝食行為，后來發(fā)現(xiàn)它還參與睡眠與覺醒、能量代謝和內(nèi)分泌等多

2、種功能的調(diào)節(jié)，大量研究表明orexin A能使表達(dá)有OXR的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)細(xì)胞的胞內(nèi)鈣增加，也能增加神經(jīng)元的胞內(nèi)鈣，對細(xì)胞的很多功能具有調(diào)節(jié)作用。然而關(guān)于orexin A對電壓依賴性鈣通道(voltage-dependent calcium channels，VDCCs)特別是下丘腦神經(jīng)元高電壓激活鈣通道（high voltage-activated calcium channels，

3、HVAs）電生理特性的影響尚不清楚，本實驗主要探討orexin A對原代培養(yǎng)下丘腦NPY神經(jīng)元HVAs的電流（IHVA）、通道的穩(wěn)態(tài)激活和失活的影響。 方法：首先運用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定NPY神經(jīng)元，然后結(jié)合形態(tài)學(xué)特征，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)及記錄IHVA后的再次鑒定比對，觀察不同濃度的orexin A對IHVA的影響，并觀察orexin A對IHVA的動力學(xué)特征的影響。 結(jié)果：多數(shù)NPY神經(jīng)元為梭形或三角形，其中又以梭

4、形最多見；0.01～100 nM orexin A都能不同程度地增加IHVA，100 nM orexin A 增加的幅度最大，EC50=0.75±0.09 nM；一般給予orexin A后30～60 s起效，2～3 min達(dá)到峰值；1 nM orexin A使IHVA的I-V曲線明顯下移，穩(wěn)態(tài)激活曲線左移即向膜電位更負(fù)的方向移動，而對穩(wěn)態(tài)失活曲線則無明顯影響。 結(jié)論：orexin A增加IHVA且呈濃度依賴性和時間依賴性，并使通

5、道更容易激活，而對通道的失活無明顯影響。 第二部分、Orexin A影響NPY神經(jīng)元高電壓激活鈣通道電流的機(jī)制 目的：以往的研究證實Orexins主要是通過活化兩個G蛋白耦聯(lián)受體OX1R和OX2R發(fā)揮作用，且OX1R選擇性與orexin A結(jié)合，先前的實驗也表明orexin A增加NPY神經(jīng)元的IHVA，本實驗主要研究orexin A調(diào)節(jié)NPY神經(jīng)元IHVA的機(jī)制。 方法：首先利用全細(xì)胞膜片鉗記錄IHVA，然后給

6、予1 nM orexin A，再分別給予10 μM SB334867（orexin A受體拮抗劑）、U73122（PLC抑制劑）和GF109203X（PKC抑制劑），觀察IHVA的變化情況；另外，也觀察了預(yù)先給予10 μM維拉帕米對IHVA的影響。 結(jié)果：1 nM orexin A引起NPY神經(jīng)元 IHVA增加的效應(yīng)分別被10 μM SB334867、U73122和GF109203X明顯抑制；預(yù)先給予10 μM維拉帕米后，1 n