多功能PAMAM聚合物遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建及體外抗腫瘤研究.pdf

1、目的：結(jié)合腫瘤部位特定的生理病理特征，本文擬構(gòu)建一種能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的主動靶向和被動靶向結(jié)合以及在腫瘤細胞內(nèi)定位響應釋藥的納米遞藥系統(tǒng)。并對復合物進行結(jié)構(gòu)表征和體外評價，為其作為抗腫瘤藥物的轉(zhuǎn)運載體提供依據(jù)。
　　方法：首先以第4代聚酰胺-胺（G4.0 PAMAM）樹狀大分子為載體材料，聚乙二醇（PEG）為修飾劑合成PEG-PAMAM，然后抗腫瘤藥物阿霉素（DOX）通過酸敏感的腙鍵（hyd）共價結(jié)合到 PAMAM表面制備 PEG-PA

2、MAM-hyd-DOX。為進一步提高復合物的抗腫瘤活性，葉酸（FA）偶聯(lián)到部分PEG鏈上。通過控制FA與PAMAM的投料比制備FA配體數(shù)目不同，PEG化程度和載藥量相近的主動靶向納米給藥系統(tǒng)FA-PEG-PAMAM-hyd-DOX(FPP-hyd-DOX)。通過薄層色譜（TLC）、核磁共振波譜（1H NMR）、紅外光譜（FTIR）、動態(tài)光散射（DLS）和透射電鏡（TEM）等手段對合成產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)進行表征，紫外分光光度法定量復合物

3、的載藥量，透析袋法考察PAMAM-DOX的體外釋放行為。通過MTT實驗優(yōu)化FA配體的連接數(shù)目，計算各復合物IC50值，熒光顯微鏡和流式細胞儀定性定量觀察KB細胞對載藥系統(tǒng)的攝取，低溫、能量耗竭和細胞抑制劑實驗考察內(nèi)吞機制及攝取途徑，激光共聚焦顯微鏡對攝取的復合物進行亞細胞定位研究。
　　結(jié)果：成功合成了FA配體數(shù)目不同，PEG化程度和載藥量相近的PAMAM-DOX復合物（PP-hyd-DOX, FPP-hyd-DOX4/1, FP

4、P-hyd-DOX8/1和FPP-hyd-DOX16/1）， TLC、1H-NMR、FTIR、DLS及TEM等對其結(jié)構(gòu)及性質(zhì)進行了驗證。PAMAM-DOX復合物的粒徑在20~30 nm之間，Zeta電位約+5 mv，TEM觀察為類球形納米粒子。復合物的載藥量為6.11±0.12(wt.%)，平均每個PAMAM表面大約偶聯(lián)了10個DOX分子。體外釋放實驗觀察PAMAM-DOX復合物在pH4.5~7.4的釋放介質(zhì)中表現(xiàn)出明顯的pH依賴性，隨

5、pH值的降低，藥物累積釋放量增多。FPP-hyd-DOX16/1（FA與PAMAM的投料比為16/1）具有優(yōu)化的配體數(shù)目且其 IC50值比無靶頭修飾的PP-hyd-DOX低2.2倍。細胞攝取實驗（熒光顯微鏡和流式細胞儀）表明PAMAM-DOX復合物的攝取具有時間依賴性，在1 h或2 h FPP-hyd-DOX16/1的攝取總量明顯高于PP-hyd-DOX。KB細胞對復合物的攝取機制研究結(jié)果表明 FPP-hyd-DOX16/1和PP-hy