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1、目的:建立一種簡(jiǎn)單、快速檢測(cè)博爾納病病毒(BDV)的雙抗體夾心ELISA法,并探索其應(yīng)用于臨床的可行性。
方法:首先根據(jù)雙抗體夾心ELISA法,分別對(duì)BDV p24小鼠單克隆抗體、BDV p24兔多克隆抗體和酶標(biāo)抗體作多梯度稀釋,以確定最佳實(shí)驗(yàn)條件,然后對(duì)該方法的精密度、靈敏度、穩(wěn)定性與特異性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。并采用已建立的雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)44例臨床確診為病毒性腦炎(VE)的患者腦脊液(CSF),以及44例神經(jīng)系統(tǒng)非
2、炎性疾病患者腦脊液樣本中是否存在BDV抗原。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)意義分析。
結(jié)果:BDV p24小鼠單克隆抗體的最佳稀釋度為1∶160,BDV p24兔多克隆抗體的最佳稀釋度為1∶2500,酶標(biāo)抗體的最佳稀釋度為1∶5000,該法的檢測(cè)靈敏度為170ng/ml,精密度批內(nèi)變異<10%,批間變異<15%,同時(shí)具有良好的穩(wěn)定性與特異性。另外用該法檢測(cè)臨床標(biāo)本其中病毒性腦炎患者腦脊液中有3例檢出BDV抗原陽(yáng)性
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