丙型肝炎病毒抗體的雙抗原夾心檢測(cè)方法的初步建立.pdf

1、丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus，HCV）感染而引起的丙型肝炎現(xiàn)已呈全球分布，將近1.8億人為丙型肝炎的感染者，約占世界人口的3％，我國(guó)的感染率約為3.2％。
　　目前采用的第三代間接ELISA檢測(cè)方法由于其在方法學(xué)上的固有缺陷，容易造成假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果和漏檢;發(fā)展雙抗原夾心ELISA法檢測(cè)試劑是試劑發(fā)展的方向，由于HCV抗原的分子量相對(duì)較小，用酶來(lái)對(duì)HCV抗原直接標(biāo)記時(shí)，極易造成空間位阻，使抗體與抗原的進(jìn)一步結(jié)合受到較

2、大的抑制，所以對(duì)HCV抗原的標(biāo)記是建立抗丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心ELISA檢測(cè)法的主要難點(diǎn)，也是目前國(guó)內(nèi)外該領(lǐng)域中研究的熱點(diǎn)。
　　本研究通過生物素親和素系統(tǒng)的放大效應(yīng)來(lái)減少抗原標(biāo)記時(shí)的空間位阻，建立抗HCV抗體的雙抗原夾心ELISA檢測(cè)方法。利用實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建好的質(zhì)粒載體，表達(dá)并純化出夾心ELISA法所用的抗原，將抗原偶聯(lián)到活化的長(zhǎng)臂生物素上，制各成長(zhǎng)臂生物素化的丙肝抗原，作為夾心抗原，用辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親合素作為酶結(jié)合

3、物，利用辣根過氧化物酶催化底物進(jìn)行顯色，建立雙抗原夾心檢測(cè)法。
　　采用本研究建立的雙抗原夾心法與對(duì)照試劑平行檢測(cè)500份臨床標(biāo)本，對(duì)檢測(cè)結(jié)果不一致的樣品采用HCVRNA定量檢測(cè)試劑盒進(jìn)行確定驗(yàn)證。結(jié)果顯示:檢測(cè)結(jié)果一致的樣品有493份，其中包括48份陽(yáng)性樣品和445份陰性樣品，檢測(cè)結(jié)果不一致的樣品有7份，其中間接法陽(yáng)性而夾心法陰性的有4份，HCVRNA檢測(cè)均為陰性;夾心法陽(yáng)性而間接法陰性的有3份，HCVRNA檢測(cè)陽(yáng)性的有2份。<