噬菌體抗體庫的構建及篩選大腸癌相關抗原抗體的研究.pdf

1、目的:該課題采用噬菌體抗體庫及基因芯片等前沿生物學技術,以大腸癌患者外周血淋巴細胞為材料,構建人大腸癌自然致敏抗體Fab段噬菌體呈現(xiàn)庫.從基因芯片篩選出來的通過初步驗證與大腸癌特異性相關的基因蛋白抗原,大腸癌組織混合抗原以及CEA抗原作為固相抗原,從噬菌體抗體庫中篩選、富集抗大腸癌相關抗體,為大腸癌的特異性診斷和免疫治療提供新的手段,并為進一步利用這些抗體篩選大腸癌相關基因并研究其功能提供庫源.結論1.成功構建了人源性大腸癌自然致敏噬菌

2、體Fab抗體庫,噬菌體抗體的庫容量達到107以上,為從噬菌體抗體庫中淘選大腸癌相關抗原的噬菌體抗體打下了良好的基礎.2.通過基因芯片對大腸癌進行了研究,結果顯示大腸癌的發(fā)生中有眾多基因發(fā)生了分子生物學改變(個體差異存在不同),其中有1807個基因發(fā)生了顯著性變化,上調表達的基因有936個,最有顯著性上調的有36個;下調表達的基因有871個,最有顯著性下調的有30個.3.挑選了大腸癌基因芯片檢測結果中的一些基因并對其進行了RT-PCR驗證

3、,發(fā)現(xiàn)JUNB基因在大腸癌組織中有高表達,通過文件檢索發(fā)現(xiàn)該基因很可能與大腸癌的發(fā)生有密切關聯(lián),可能是一個大腸癌基因的較特異性蛋白.4.從我們構建的噬菌體抗體庫中淘選出來的相關抗體,通過ELISA試驗初步鑒定,發(fā)現(xiàn)它們與相應的抗原有較特異性的結合活性.5.淘選出來的各抗原的陽性單克隆噬菌體抗體,經過DNA測序及序列的同源性分析,發(fā)現(xiàn)與已經登錄的抗體序列有90％以上的同源性,進一步驗證了該研究淘選出來的是噬菌體抗體是具人源性活性的抗體.6