IFN-γ基因治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IFNγ基因治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：丁強(qiáng)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：吳文溪2002.4.18南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文長旺盛的LOVO、SW620、HCTll6BG細(xì)胞內(nèi)并利用用PCR、RT—PCR對IFN—Y基因的整合和表達(dá)進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明IFNY基因已成功的進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)并實(shí)現(xiàn)表達(dá)。利用雙抗體夾心ELISA法測定基因轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN—Y的活性。結(jié)果顯示基因轉(zhuǎn)染后4小時(shí)細(xì)胞上清內(nèi)

2、即可檢測到IFNY活性，24小時(shí)達(dá)到最大值，其活性持續(xù)6天仍未見明顯下降不同的細(xì)胞株所分泌的IF彬y的量不同，顯示了細(xì)胞株之間生物學(xué)特性的差異。，二、IFNY基因轉(zhuǎn)染對腫瘤細(xì)胞的作用主要是通過細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測IFNY基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞表面抗原的表達(dá)情況、對細(xì)胞的生長抑制、細(xì)胞周期的影響情況，初步探討IFN—y基因轉(zhuǎn)染后抗腫瘤作用的機(jī)制。6手1用放射免疫法檢測基因轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞分泌CEA的變化，分別收集基因轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)上清，利用相同培

3、養(yǎng)條件下未進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)上清作對照，結(jié)果顯示：經(jīng)基因轉(zhuǎn)染后，原來高表達(dá)CEA的細(xì)胞株(LOVO、HCTll6BG)其上清中CEA含量增加明顯(p005)利用流式細(xì)胞儀對相同培養(yǎng)條件下基因轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞表面HLADR的表達(dá)情況檢測結(jié)果可以看出：導(dǎo)入IFNv基因后，各細(xì)胞株表面的H換DR的表達(dá)量明顯增強(qiáng)(p001)。通過對IFNY基因轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞的凋亡情況和細(xì)胞周期的變化顯示：轉(zhuǎn)染IFNY基因后促進(jìn)了LOVO細(xì)胞的凋亡(p005)