SURVIVIN和PTEN的表達(dá)與宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其臨床意義的研究.pdf

1、宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，其中又以宮頸鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)最為多見。我國是宮頸癌的高發(fā)地區(qū)，尤其在農(nóng)村，其發(fā)生率及死亡率均居?jì)D女惡性腫瘤的首位。宮頸癌的臨床分期、腫瘤分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移被公認(rèn)為是影響宮頸癌預(yù)后的重要因素，正確評(píng)估宮頸癌生物學(xué)行為及其預(yù)后情況，對(duì)臨床治療及改善患者的生存質(zhì)量具有極其重要的意義。 腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素作用的復(fù)雜過程，

2、癌基因的激活，抑癌基因的失活和細(xì)胞的凋亡等均參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程。淋巴系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移亦是多基因異常共同作用的結(jié)果，通過細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、生長周期調(diào)控、凋亡調(diào)節(jié)等網(wǎng)絡(luò)來控制腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移。近年來，宮頸鱗狀細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已被認(rèn)為是重要的預(yù)后因素并引起廣泛的重視。如何在術(shù)前檢測是否發(fā)生淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有待于進(jìn)一步的研究。 Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白，主要是抗凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂，參與細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)腫瘤血管生成

3、。它主要是通過抑制蛋白酶級(jí)聯(lián)過程中位于下游的半胱天冬氨酸酶caspase-3和caspase-7的活性而發(fā)揮凋亡抑制作用。 PTEN是一個(gè)具有脂質(zhì)磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性的腫瘤抑癌基因，主要是阻斷細(xì)胞接受的外界生存增殖信號(hào)，誘導(dǎo)凋亡；抑制細(xì)胞增殖、遷移；抑制P13K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)凋亡。 Survivin和PTEN是腫瘤細(xì)胞浸潤與轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)因子，與胃癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)

4、。Survivin和PTEN的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生進(jìn)展中的作用也逐步受到重視，但目前相關(guān)的研究較少，且研究結(jié)果不完全一致，有必要進(jìn)一步探討。本研究采用免疫組化方法，通過觀測Survivin和PTEN在慢性宮頸炎組織、有/無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌中的表達(dá)情況，來分析Survivin和PTEN在宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)情況及臨床意義。 目的： 研究Survivin和PTEN在慢性宮頸炎組織中，無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有腹膜后淋巴結(jié)

5、轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌中的表達(dá)，探討其在宮頸鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。 材料與方法： 1.標(biāo)本來源 取中山大學(xué)附屬二院和深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院2007年1月～2007年9月的宮頸鱗癌患者65例，慢性宮頸炎患者10例。患者年齡24-63歲，平均43.6±8.6歲。所有病例取標(biāo)本前均未實(shí)行放療和化療，資料完整，且經(jīng)病理確診。其中伴有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌患者35例，年齡24-63歲，平均43.5±7.5歲。無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮

6、頸鱗癌患者30例，年齡30-61歲，平均42.2±9.1歲，兩組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。宮頸鱗癌按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，1996)臨床分期，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組包括Ⅰ期13例，Ⅱ期22例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Ⅰ期24例，Ⅱ期6例，兩組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。細(xì)胞分化程度，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組G12例，G218例，G315例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組G11例，G216例，G313例。兩組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。全部標(biāo)本經(jīng)10％福爾馬林液固定，石蠟包埋。 2.實(shí)驗(yàn)

7、分組 將所選病例分為3組：慢性宮頸炎組10例，無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組30例，有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組35例。 3.實(shí)驗(yàn)試劑 Survivin多克隆抗體、PTEN單克隆抗體、即用型SP試劑盒和DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 4.免疫組化檢測 采用S-P法染色，切片常規(guī)脫蠟水化后，加入過氧化酶阻斷溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，抗原修復(fù)后加入第一抗體，室溫下孵育后再加入鏈霉素抗

8、生物素蛋白-過氧化物酶溶液，DAB顯色，蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。 5.試驗(yàn)對(duì)照 陰性對(duì)照組：用PBS代替一抗。陽性對(duì)照組：采用已知的子宮頸鱗癌組織切片。 6.結(jié)果判斷 免疫組化染色結(jié)果按盲法由一位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生獨(dú)立進(jìn)行判斷。光學(xué)顯微鏡下觀察并攝片，見細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性信號(hào)。陽性信號(hào)采用Image-pro-plus5.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，Survivin和PTEN免疫反應(yīng)產(chǎn)物的

9、標(biāo)記用光密度(A)表示，在鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野系統(tǒng)自動(dòng)隨機(jī)測定3個(gè)不同的部位，提取陽性細(xì)胞，測定Survivin和PTEN的A值。 7.統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布者用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，正態(tài)數(shù)據(jù)多組間比較采用單因素方差分析，兩組間的比較采用最小顯著差異法(LSD，Least significant Difference)檢驗(yàn)，非正態(tài)數(shù)據(jù)兩組間的比較采用Wilcoxon秩和

10、檢驗(yàn)，采用pearson進(jìn)行相關(guān)分析，取p<0.05為標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： 1.Survivin和PTEN在慢性宮頸炎組織，宮頸鱗癌組織中的表達(dá) Survivin在慢性宮頸炎組、無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組、有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組中的平均光密度值(A)分別為：0.121±0.145，0.217±0.018，0.308±0.051。Survivin的表達(dá)在有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組高于無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組

11、和慢性宮頸炎組(p<0.05)，無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組高于慢性宮頸炎組(p<0.05)。 PTEN在慢性宮頸炎、無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組、有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組中的平均光密度值(A)分別為：0.300±0.024，0.215±0.034，0.126±0.022。PTEN的表達(dá)在慢性宮頸炎組高于宮頸鱗癌組(p<0.05)，無腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組高于有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組的表達(dá)(p<0.05)。

12、2. Survivin和PTEN在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織表達(dá)的相關(guān)性 在宮頸鱗癌組織中，Survivin的表達(dá)上調(diào)，PTEN的表達(dá)下調(diào)，提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，二者在有腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸鱗癌組中，Survivin與PTEN表達(dá)的相關(guān)系數(shù)R=-0.639，兩者有負(fù)相關(guān)性。(P<0.05)。 結(jié)論： 1.宮頸鱗癌組織中Survivin表達(dá)上調(diào)，PTEN的表達(dá)下調(diào)。Survivin及PTEN的表達(dá)與宮頸鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)