CHO表達(dá)系統(tǒng)的遺傳改造.pdf

1、哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能,表達(dá)的糖基化蛋白藥物在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面最接近天然蛋白分子,是目前重組糖蛋白藥物生產(chǎn)的首選體系.對于較復(fù)雜的分子如基因工程抗體,以及基因治療用病毒載體,哺乳動物細(xì)胞更是首選的表達(dá)宿主.但哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn)也很明顯,如表達(dá)量低、大規(guī)模培養(yǎng)困難、生產(chǎn)成本高昂等.一株成功的工程細(xì)胞除了要求目的蛋白的表達(dá)量高外,還必須適應(yīng)無血清培養(yǎng)基培養(yǎng);必須具有對不利環(huán)境的抵抗能力,即抗凋

2、亡能力;對于非直接懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,還必須具備在無血清培養(yǎng)條件下的貼壁能力.工程細(xì)胞上述能力的獲得僅由培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件優(yōu)化設(shè)計(jì)很難實(shí)現(xiàn),必須從工程細(xì)胞本身著手,對細(xì)胞本身的生理特征進(jìn)行改造,才有可能實(shí)現(xiàn).鑒于中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞是目前基因工程制藥最常用的哺乳動物宿主細(xì)胞,該研究集中對CHO細(xì)胞的部分基因進(jìn)行了過表達(dá)或抑制,以期獲得上述能力.實(shí)驗(yàn)分成四部分:1.高效哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建;2.抗凋亡工程細(xì)胞株CHO-A6的構(gòu)建