13490.表達(dá)單克隆抗體的重組cho細(xì)胞篩選

1、分類號：Q8131密級：UDC：指導(dǎo)教師姓名：華東理工大學(xué)學(xué)位論文表達(dá)單克隆抗體的重組CHO細(xì)胞篩選張存超譚文松教授華東理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)18樓1015室申請學(xué)位級別：碩士論文定稿日期：20120216論文答辯日期：20120220學(xué)位授予單位：華東理工大學(xué)，，‘t，，、‘r^n學(xué)位授予日期：刪jj≮ujJ‘lH答辯委員會(huì)主席：評閱人：周燕教授張毅研究員張旭副教授蔡海波教授葉朝陽副教授華SJ匣zr_大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁表達(dá)單克隆抗體的重組C

2、HO細(xì)胞篩選摘要單克隆抗體廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而由于生產(chǎn)所用細(xì)胞株表達(dá)水平和生產(chǎn)規(guī)模的限制，目前單克隆抗體的產(chǎn)能尚不能滿足日益增長的市場需求?？贵w表達(dá)所用細(xì)胞株的產(chǎn)物表達(dá)水平是限制抗體產(chǎn)量的重要因素?；虮磉_(dá)的異質(zhì)性導(dǎo)致不同細(xì)胞株抗體比生產(chǎn)速率表現(xiàn)出異質(zhì)性，這使得通過細(xì)胞篩選獲得高產(chǎn)細(xì)胞株成為可能。本文以表達(dá)單克隆抗體的重組CHO細(xì)胞為研究對象，使用有限稀釋法從2450個(gè)克隆中篩選獲得高產(chǎn)細(xì)胞株NO1

3、50和NO213，在HycloneSFM4CHO無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行了批次培養(yǎng)，兩者抗體產(chǎn)量分別比母細(xì)胞株(對照)增加了130％和247％。通過研究這兩株細(xì)胞的代謝副產(chǎn)物、細(xì)胞株穩(wěn)定性和表達(dá)抗體的質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，在批次培養(yǎng)中細(xì)胞株NO213最大乳酸產(chǎn)量為227mmol／L，比細(xì)胞株NO150降低56mmol／L，乳酸對葡萄糖的得率與對照相比降低了273％，穩(wěn)定性亦優(yōu)于細(xì)胞株NO150和對照。產(chǎn)物質(zhì)量方面，兩株細(xì)胞表達(dá)的抗體均無二聚體，其分子量和

4、抗體的抗原結(jié)合力與對照無顯著差異。將篩選出的細(xì)胞株NO213在2L反應(yīng)器中進(jìn)行批次培養(yǎng)，其最大活細(xì)胞密度可達(dá)514x105cells／mL，最大抗體產(chǎn)量達(dá)1972mg／L，活細(xì)胞密度對時(shí)間的積分(IVCC)為168109cellsday／L，分別比對照提高了321％、240％和500％。通過本文研究工作，獲得了抗體產(chǎn)量和穩(wěn)定性較好的細(xì)胞株，且其表達(dá)的抗體質(zhì)量與對照相比無顯著差異。本研究為后續(xù)培養(yǎng)基和培養(yǎng)工藝優(yōu)化提供了較好的細(xì)胞株，為最終