祛風通竅方對血管性癡呆模型大鼠作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察祛風通竅方對血管性癡呆（VD）大鼠定位航行、空間探索能力，海馬CA1區(qū)神經元細胞形態(tài)，ChAT、Tau、Aβ、VEGF蛋白表達，IL-1β、IL-6、TNF-α濃度的影響，探討祛風通竅方對血管性癡呆模型大鼠學習記憶能力的保護作用機制。
　　方法：
　　1.分組：水迷宮篩選符合實驗要求大鼠，隨機分為假手術組、尼莫地平組、模型組、祛風通竅方高、中、低劑量組，每組大鼠各10只。
　　2.給藥方法：高

2、、中、低劑量組分別給予祛風通竅方26.8g/kg/d、13.4g/kg/d、6.7g/kg/d灌胃（按照等體積3ml的標準計算高、中、低劑量組大鼠灌胃藥物的濃度）。模型組、假手術組予以3ml生理鹽水灌胃。尼莫地平組予以尼莫地平混懸液6.25mg/kg/d灌胃。每天上午灌胃一次，連續(xù)30天。
　　3.取材方法：配置戊巴比妥鈉濃度1％，對實驗大鼠進行腹腔麻醉。大鼠仰臥位固定于消毒實驗臺，開胸取血，離心,取上清液，-20℃冰箱保存，用于

3、ELISA檢測IL-1β、IL-6、TNF-α的濃度。采集血液后，一部分大鼠迅速斷頭取出新鮮腦組織，將腦組織置于EP管中保存，用于半定量PCR及Western Blot檢測VEGF蛋白。另一部分大鼠進行灌注取腦，用于HE染色和免疫組化檢測ChAT、Tau、Aβ蛋白。
　　4.觀察指標：Morris水迷宮檢測大鼠定位航行、空間探索能力；HE染色光鏡觀察大鼠海馬CA1區(qū)神經元細胞形態(tài)；免疫組化檢測ChAT、Tau、Aβ蛋白表達；ELI

4、SA法檢測IL-6、IL-1β、TNF-α濃度；半定量PCR法測定VEGFmRNA表達；Western Blot法檢測VEGF蛋白表達。
　　結果：
　　1.行為學：與假手術組比較，高、中、低劑量組、模型組、尼莫地平組大鼠EL延長，第I象限游泳的時間縮短，經過原平臺范圍的次數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），高劑量組大鼠EL隨著訓練時間延長而縮短，從第四天開始接近于假手術組。與模型組比較，高、中、低劑量組、尼莫地平組

5、大鼠的EL隨著訓練時間延長而縮短，第I象限游泳的時間延長，經過原平臺范圍的次數(shù)增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組EL隨著訓練時間延長而縮短，第I象限游泳的時間延長，經過原平臺范圍的次數(shù)增加，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；高、中劑量組大鼠EL隨著訓練時間延長而縮短，第I象限游泳的時間延長，經過原平臺范圍的次數(shù)增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，以高劑量組大鼠行為學改善更為明顯，與中劑量組

6、比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.HE染色：同倍率光鏡下觀察,假手術組海馬CA1區(qū)神經元細胞排列整齊，胞質均質紅染，胞核大而圓，核仁清晰明顯。模型組海馬CA1區(qū)神經細胞排列紊亂，數(shù)量減少，細胞輪廓、胞核模糊，部分甚至看不到細胞。高、中劑量組神經細胞排列比較規(guī)則，細胞輪廓、核膜與核仁比較清晰，且高劑量組神經細胞形態(tài)優(yōu)于中劑量組，更為接近正常形態(tài)。低劑量組和尼莫地平組的神經元細胞形態(tài)介于模型組與中劑量組之間。

7、　　3.ChAT、Tau、Aβ蛋白檢測：ChAT、Tau、Aβ陽性細胞均表現(xiàn)為胞漿內呈現(xiàn)棕黃色的沉淀物。
　?、貱hAT蛋白：與假手術組比較，模型組、各給藥組ChAT蛋白MOD值有所降低（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組ChAT蛋白MOD值有所升高（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組ChAT蛋白MOD值升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05)；高、中劑量組ChAT蛋白MOD值有所升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）

8、。其中，以高劑量組升高最為明顯，與中劑量比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?、赥au蛋白：與假手術組比較，模型組、各給藥組Tau蛋白MOD值有所升高（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組Tau蛋白MOD值降低（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組Tau蛋白MOD值降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；高、中劑量組Tau蛋白MOD值有所降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，以高劑量組降低最為明顯，與中劑

9、量組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?、跘β蛋白：與假手術組比較，模型組、各給藥組Aβ蛋白MOD值有所升高（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組Aβ蛋白MOD值有所降低（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組Aβ蛋白MOD值降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；高、中劑量組Aβ蛋白MOD值有所降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，以高劑量組降低最為明顯，與中劑量組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）

10、。
　　4.IL-6、IL-1β、TNF-α檢測：與假手術組比較，模型組、各給藥組IL-6、IL-1β、TNF-α濃度有所升高（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組IL-6、IL-1β、TNF-α濃度降低（P<0.05）。與尼莫地平組比較，高、中、低劑量組IL-6、IL-1β、TNF-α濃度有所降低（P<0.05）。其中，以高劑量組降低最為明顯，與中劑量組比較，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　5.VEGFmRNA表達檢測：與假手

11、術組相比，模型組、各給藥組VEGFmRNA表達有所增加（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組VEGFmRNA表達有所增加（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組VEGFmRNA表達增加，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；高、中劑量組VEGFmRNA表達有所增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，以高劑量組增加最為明顯，與中劑量組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6.VEGF蛋白表達檢測：與假手術組相比，模

12、型組、各給藥組VEGF蛋白表達有所增加（P<0.05）。與模型組比較，各給藥組VEGF蛋白表達有所增加（P<0.05）。與尼莫地平組比較，低劑量組VEGF蛋白表達增加，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；高、中劑量組VEGF蛋白表達有所增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其中，以高劑量組增加最為明顯，與中劑量組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　1.血管性癡呆大鼠存在學習記憶能力的下降；海馬CA1區(qū)

13、神經元細胞形態(tài)紊亂，ChAT蛋白表達降低,Tau、Aβ蛋白表達升高，IL-6、IL-1β、TNF-α的濃度升高，VEGF表達增加。
　　2．祛風通竅方能有效改善VD大鼠的行為學，保護VD大鼠海馬CA1區(qū)神經元細胞形態(tài)。
　　3．祛風通竅方對血管性癡呆模型大鼠的作用機制可能與以下有關：
　?、偕险{VD大鼠ChAT的表達，改善膽堿能系統(tǒng)的功能；
　?、谝种芕D大鼠腦內Tau蛋白過度磷酸化，降低Aβ蛋白表達，減少神經元