仿生消化法評估非淀粉多糖酶效應(yīng)的研究.pdf

1、本試驗首先研究了不同緩沖液及固-液分離方法對酶制劑活性的影響，然后通過單胃動物仿生消化系統(tǒng)（SDS-2）測定飼料原料還原糖釋放量的重復(fù)性和可加性，檢驗仿生消化方法可行性;進一步研究了非淀粉多糖酶添加水平對豬飼糧還原糖釋放量的影響，為飼用酶制劑產(chǎn)品的效應(yīng)評估提供科學(xué)參考。具體內(nèi)容如下:
　　試驗一旨在探討固態(tài)酶制劑評估中酶制劑的適宜提取液及固-液分離方法。采用4×3雙因素完全隨機設(shè)計，其中提取液分別為去離子水、乙酸-乙酸鈉緩沖液(0

2、.1mol/L)、磷酸鹽緩沖液(0.05molL)和0.9％NaCl溶液;溶液提取后的固-液分離方法分別為不分離、3000r/min離心3min和中速濾紙過濾。每個處理5個重復(fù)，每個重復(fù)設(shè)2個平行，測定各處理的酶活性;并研究提取液的類型對酶制劑產(chǎn)品（α-半乳糖苷酶除外）溶解離心后溶液中溶質(zhì)及蛋白質(zhì)濃度的影響。研究結(jié)果表明:乙酸-乙酸鈉溶液溶解木聚糖酶活性最高(P＜0.05);乙酸-乙酸鈉溶液、磷酸鹽緩沖液及0.9％NaCl溶液溶解β-葡

3、聚糖酶活性類似，均顯著地高于去離子水(P＜0.05);去離子水溶解β-甘露聚糖酶活性最高，其次為乙酸-乙酸鈉溶液，兩者都顯著地高于磷酸鹽緩沖液和0.9％NaCl溶液(P＜0.05)。提取液類型對α-半乳糖苷酶活性無顯著影響(P＞0.05)。酶制劑溶解后的固-液分離方法對木聚糖酶的測定活性無顯著性影響(P＞0.05);提取液離心或過濾后β-葡聚糖酶活性最高;提取液離心后β-甘露聚糖酶活性最高;而提取液不分離時α-半乳糖苷酶的活性最高。提取

4、液的種類和酶制劑溶解后的固-液分離方法對四種非淀粉多糖酶的測定活性有極顯著的交互作用（P＜0.01）。乙酸-乙酸鈉緩沖液對木聚糖酶制劑的溶解度最大，去離子水和0.9％NaCl溶液均對β-葡聚糖酶及β-甘露聚糖酶制劑的溶解度最大。乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解木聚糖酶、β-葡聚糖酶和β-甘露聚糖酶提取液中蛋白質(zhì)的濃度均最低。
　　試驗二旨在通過單胃動物仿生消化系統(tǒng)測定豬飼糧消化后還原糖釋放量，探討測定結(jié)果間的線性、重復(fù)性和可加性。線性試驗以

5、75％玉米+25％大豆粕為研究對象，采用單因素完全隨機設(shè)計，設(shè)置0.2、0.4、0.6、0.8和1.0g五個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)1根消化管;重復(fù)性試驗采用單因素完全隨機設(shè)計，玉米豆粕飼糧、大麥、花生粕和米糠每一樣品設(shè)3個批次，每個批次4個重復(fù);可加性試驗采用單因素完全隨機設(shè)計，共19個處理，其中1～7分別為玉米、大麥、高粱、大豆粕、花生粕、棉籽粕和米糠，8～19為2種或2種以上飼料原料按不同比例組合制備的12種飼糧。每個處理

6、4個重復(fù)，每個重復(fù)1根消化管，在仿生消化系統(tǒng)中以豬模擬消化液及流程測定各處理還原糖釋放量。結(jié)果表明:飼糧上樣量與還原糖總釋放量呈線性關(guān)系，上樣量在0.2～0.8g間的線性關(guān)系(R2=0.9992)高于上樣量為0.2～1.0g的線性關(guān)系(R2=0.9979)，上樣量在0.2～0.8g間其還原糖相對釋放量在559.56～582.70mg/g變化，變異系數(shù)為1.66％，而上樣量為1.0g時，還原糖相對釋放量相對0.2～0.8g的平均值下降5.

7、37％;三個批次的玉米豆粕飼糧、大麥、花生粕和米糠的還原糖釋放量的批內(nèi)變異系數(shù)、批間變異系數(shù)和總變異系數(shù)均不大于1.68％，最大絕對偏差分別為5.16、1.17、6.26和1.73 mg/g;12種飼糧還原糖釋放量的實測值略高于計算值(P＜0.05)，而從還原糖釋放量的計算值對實測值的線性回歸可以得出，回歸模型的決定系數(shù)為0.9996(P＜0.05)，截距與0比較無顯著性差異(截距=-1.99，P=0.4805)，斜率與1比較無顯著性差

8、異(斜率=0.99，P=0.5141)。
　　試驗三研究了非淀粉糖酶(NSP)添加量對豬日糧還原糖釋放效應(yīng)的影響。采用單因素完全隨機設(shè)計，在玉米、小麥、大麥和大豆粕中分別添加不同水平的木聚糖酶(0、900、3033、6066和10000U/kg)、β-葡聚糖酶(0、300、1567、3133和5000U/kg)、β-甘露聚糖酶(0、30、323、647和1000U/kg)和α-半乳糖苷酶(0、300、3233、6467和10000

9、U/kg)，在仿生消化系統(tǒng)中以豬模擬消化液及流程測定各處理還原糖釋放量。結(jié)果表明:在不同的飼料原料中所需的NSP酶種類和含量不同。在玉米、小麥和大麥中，木聚糖酶、葡聚糖酶和甘露聚糖酶各添加水平的加酶組還原糖釋放量顯著高于空白對照組(P＜0.05)，而木聚糖酶添加水平對大豆粕還原糖釋放量差異不顯著(P＞0.05)，葡聚糖酶、甘露聚糖酶和半乳糖苷酶的添加水平達到一定劑量時(葡聚糖酶3133U/kg，甘露聚糖酶3233U/kg，半乳糖苷酶32

10、3U/kg)，大豆粕還原糖釋放量才顯著高于空白對照組(P＜0.05);其中小麥還原糖釋放量隨木聚糖酶添加水平具有線性升高的趨勢（P=0.0743），大麥還原糖釋放量隨葡聚糖酶添加水平也具有線性升高的趨勢（P=0.0560），而大豆粕還原糖釋放量隨甘露聚糖酶和半乳糖苷酶添加水平的升高呈線性和二次曲線增加（P＜0.05）。通過比較四種NSP酶各加酶組間還原糖釋放增加量，可以看出小麥中還原糖釋放增加量隨木聚糖酶添加水平呈線性升高趨勢（P=0.