樟樹LFY、UFO和FUL基因克隆及功能分析.pdf

1、香樟（Cinnamomum camphora）是樟目樟科樟屬的代表樹木，是一種常綠大喬木。成年樟樹枝葉繁茂，氣味芬香，是中國(guó)長(zhǎng)江中下游地區(qū)常見園林樹種，廣泛用于園林綠化和市政道路綠化中。但是，樟樹的核果成熟后，會(huì)從樹上掉落下來(lái)，砸在行人、車輛以及地面上，給人們?nèi)粘Ｉ顜?lái)不便，同時(shí)還造成一定的污染。針對(duì)這個(gè)問題，本課題從植物花發(fā)育關(guān)鍵基因LFY、 UFO、FUL出發(fā)，分離克隆樟樹中這三個(gè)基因的同源基因，分別命名為CcLFY、 CcUFO

2、、CcFUL，進(jìn)行基因功能分析，為以后獲得少花少果乃至無(wú)花無(wú)果的樟樹提供一定指導(dǎo)信息。
　　本課題獲得CcLFY、 CcUFO、CcFUL序列后，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)行基因序列分析和構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，然后進(jìn)行半定量表達(dá)分析，確定這三個(gè)基因功能。最后，構(gòu)建含目的基因的超表載體，進(jìn)行擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化，觀察分析轉(zhuǎn)基因擬南芥表型，進(jìn)行目的基因的功能鑒定。此外，本課題還進(jìn)行了酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，分析CcLFY、CcUFO之間是否存在互作關(guān)系。本課題

3、主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過同源克隆技術(shù)、側(cè)翼擴(kuò)增技術(shù)和常規(guī)PCR，擴(kuò)增得到了CcFUL基因全長(zhǎng)序列;根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)、側(cè)翼擴(kuò)增技術(shù)和常規(guī)PCR，擴(kuò)增得到了CcUFO基因全長(zhǎng)序列;利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和常規(guī)PCR，擴(kuò)增得到了CcLFY基因全長(zhǎng)序列。然后根據(jù)擴(kuò)增得到的序列，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)行同源分析，結(jié)果表明這三個(gè)目的基因與雙子葉植物親緣關(guān)系較近。
　　(2)采集樟樹不同部位和時(shí)期的組織，利用CTAB法提取RNA，進(jìn)行半定量表

4、達(dá)分析，結(jié)果表明CcLFY、 CcUFO、CcFUL與樟樹花發(fā)育和果實(shí)形成有關(guān)。
　　(3)利用pCAMBIA2300表達(dá)載體，通過傳統(tǒng)質(zhì)粒重組的方法，成功構(gòu)建了35S-CcLFY、35S-CcUFO、35S-CcFUL等三個(gè)超表載體。然后將其電轉(zhuǎn)進(jìn)農(nóng)桿菌菌株GV1303中，最后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，進(jìn)行擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了8株CcLFY陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因擬南芥，11株CcUFO陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因擬南芥以及6株CcFUL陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因擬南芥。觀察