蛋白激酶C(PKCs)對丙泊酚引起臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS激活的調(diào)節(jié)角色.pdf

1、目的：探討蛋白激酶C(proteinkinaseC，PKCs)對丙泊酚引起人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)內(nèi)皮源性一氧化氮合成酶(endothelialnitricoxidesynthase，eNOS)激活和隨后一氧化氮(nitricoxide，NO)產(chǎn)量的調(diào)節(jié)角色。
　　 方法：體外培養(yǎng)的HUVECs2-5代作為實驗對象。首先用丙泊酚(1～100μmol

2、/L)分別處理細(xì)胞1和24h，建立藥物引起eNOS激活的量效關(guān)系曲線；用丙泊酚5μmol/L和50μmol/L分別處理細(xì)胞0、5min、1、6和24h，建立藥物激活eNOS的時效曲線。其次用特異磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)抑制劑LY294002(lOμmol/L)和PKC廣譜抑制劑bisindolylmaleimideI(BisI，1μmol/L)預(yù)處理細(xì)胞30分鐘，再用丙泊酚（

3、5μmnol/L和50μmol/L）處理細(xì)胞1和24小時，觀察PI3K和PKC通路是否介導(dǎo)丙泊酚對eNOS的激活。最后用PKC各亞型特異抑制劑，siRNA或Adv-caPKC進(jìn)一步確定PKC-a、PKC-δ、PKC-ε、PKC-θ和PKC-ξ對丙泊酚引起臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS激活的調(diào)節(jié)角色。
　　 結(jié)果：丙泊酚呈劑量、時間依賴性升高P-Ser1177-eNOS的表達(dá)。PI3K抑制劑LY294002，不影響異丙酚（5和50μm

4、ol/L）誘導(dǎo)eNOS磷酸化。PKC抑制劑BisI能有效地阻止異丙酚誘導(dǎo)的eNOS的活化。對PKC亞型進(jìn)一步的分析顯示，用PKC（PKC-a、PKC-δ、PKC-ε、PKC-θ和PKC-ξ）特異亞型抑制劑、siRNA或Adv-caPKC選擇性的抑制或過表達(dá)PKC各亞型發(fā)現(xiàn)，PKC-a和PKC-θ對丙泊酚（5和50μmol/L）誘導(dǎo)的急、慢性eNOS激活有顯著增強(qiáng)效應(yīng)；PKC-ε對丙泊酚(50μmol/L)誘導(dǎo)的慢性eNOS激活有顯著增強(qiáng)