塞來昔布聯(lián)合吉非替尼在非小細(xì)胞肺癌中的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過觀察塞來昔布聯(lián)合吉非替尼分別對表皮生長因子受體(EGFR)突變細(xì)胞株(HCC827)和 EGFR野生型細(xì)胞株(A549)的增殖和凋亡的影響，探討塞來昔布聯(lián)合吉非替尼是否對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系具有協(xié)同殺傷作用及與 EGFR基因狀態(tài)之間的相關(guān)性；并通過 Western blot檢測 COX-2和p-EGFR相關(guān)蛋白的表達，對其機制進行初步探討；從而為臨床上塞來昔布與吉非替尼的聯(lián)合使用提供依據(jù)，為晚期非小細(xì)胞肺癌患者的個體化治療

2、提供更完善的方案。
　　方法：塞來昔布、吉非替尼單獨及聯(lián)合干預(yù)兩種細(xì)胞系48h后，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定細(xì)胞生長抑制率；AlinexinV/PI法檢測細(xì)胞凋亡率；Western blot法檢測 p-EGFR和 COX-2蛋白表達。實驗數(shù)據(jù)以 x±S表示，用 SPSS17.0軟件進行方差分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：1.四甲基偶氮唑鹽(MTT法)檢測藥物分別對兩種細(xì)胞生長的抑制作用：不同濃度的塞來昔布和吉非替

3、尼單獨或聯(lián)合干預(yù)兩種細(xì)胞48h后，MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率提示兩者對 HCC827、A549細(xì)胞的殺傷效應(yīng)呈劑量依賴性。HCC827細(xì)胞不同濃度聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長抑制率均大于單獨用藥組的細(xì)胞生長抑制率(P<0.05)；但 A549細(xì)胞低濃度聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長抑制率與單獨用藥組的細(xì)胞生長抑制率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但高濃度聯(lián)合時聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長抑制率大于單獨用藥組的細(xì)胞生長抑制率(P<0.05)。
　　2.

4、流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物對細(xì)胞凋亡的影響：HCC827細(xì)胞正常對照組的早期凋亡率為(0.26±0.10)％，10umol/L塞來昔布聯(lián)合10umol/L吉非替尼處理細(xì)胞48h后，可見(39.22±3.67)%的細(xì)胞凋亡，明顯高于10umol/L塞來昔布、10umol/L吉非替尼單獨用藥的細(xì)胞凋亡率(9.71±0.94、21.54±1.98)%；但對于 A549細(xì)胞，正常對照組的早期凋亡率為(0.84±0.10)%，10umol/L塞來昔布聯(lián)合

5、10umol/L吉非替尼處理細(xì)胞48h后，可見(4.92±0.36)%的細(xì)胞凋亡，與10umol/L塞來昔布、10umol/L吉非替尼單獨用藥的細(xì)胞凋亡率(1.88±0.53、4.77±0.55)%之間差異無顯著性(P＜0.05)。提高用藥濃度后，我們發(fā)現(xiàn)80umol/L塞來昔布聯(lián)合40umol/L吉非替尼處理細(xì)胞48h后，可見(25.91±4.08)%的細(xì)胞凋亡，明顯高于80umol/L塞來昔布、40umol/L吉非替尼單獨用藥的細(xì)胞

6、凋亡率(6.30±1.02、18.46±1.92)%。
　　3.Western blot法檢測藥物對細(xì)胞 COX-2、p-EGFR蛋白的影響：兩種細(xì)胞中 COX-2和 p-EGFR均有表達。80umol/L塞來昔布、40umol/L吉非替尼及兩藥聯(lián)合分別作用于兩種細(xì)胞后，與單藥組相比，兩藥聯(lián)合組可顯著下調(diào) COX-2、p-EGFR蛋白的表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1.在 EGFR基因突變型細(xì)胞株 HCC827中，塞來昔