塞來昔布聯(lián)合厄羅替尼對(duì)人肺癌祼鼠移植瘤生長(zhǎng)及血管生成的影響.pdf

1、研究背景:
　　 肺癌被認(rèn)為是所有腫瘤中致死率最高的腫瘤。肺癌的80％為非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung caancer，NSCLC)，65％的非小細(xì)胞肺癌確診時(shí)已處于晚期，喪失手術(shù)機(jī)會(huì)。晚期肺癌非小細(xì)胞肺癌目前主要治療手段為放療、化療，但放療、化療的副反應(yīng)及并發(fā)癥多，病人的生活質(zhì)量受到嚴(yán)重影響，嚴(yán)重影響肺癌的預(yù)后。分子靶向治療針對(duì)腫瘤細(xì)胞特異靶點(diǎn)，較少損傷正常細(xì)胞和組織，相對(duì)放療、化療有明顯的優(yōu)勢(shì)。目前研究

2、比較深入的靶點(diǎn)有:表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor receptor, EGFR)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowthfactor,VEGF)，環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)，蛋白激酶A(protein kinaseA，PKA)等。在肺癌的靶向治療中，針對(duì)EGFR介導(dǎo)的信號(hào)通路的抗腫瘤治療已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。針對(duì)EGFR的抗肺癌治療目前研究的

3、比較成熟的有EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑（吉非替尼、厄羅替尼）和EGFR的單克隆抗體（昔妥西單抗）。吉非替尼、厄羅替尼已經(jīng)被批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床肺腺癌的二線或三線治療?，F(xiàn)在越來越多的試驗(yàn)證據(jù)表明COX-2在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和血管形成上起著關(guān)鍵作用。COX-2可以作為腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)，通過抑制COX-2介導(dǎo)的一系列信號(hào)通路，干預(yù)腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)生物學(xué)行為，起到抗腫瘤作用。
　　 也有有研究表明，EGFR和COX-2介導(dǎo)的信號(hào)通路之

4、間存在著交叉對(duì)話，共同參與與腫瘤形成及生長(zhǎng)相關(guān)的關(guān)鍵生物過程，應(yīng)用藥物聯(lián)合阻斷EGFR和COX-2介導(dǎo)的信號(hào)通路可起到協(xié)同的抗腫瘤效應(yīng)。EGFR和COX-2雙靶點(diǎn)阻斷后的抗腫瘤效應(yīng)在頭頸鱗癌的實(shí)驗(yàn)室及臨床研究均有報(bào)道，而在肺癌治療的研究中，目前僅存在于細(xì)胞水平。本研究旨在通過建立肺癌裸鼠移植瘤模型，研究這種靶向聯(lián)合治療對(duì)肺腺癌的生長(zhǎng)，腫瘤微血管形成及相關(guān)蛋白表達(dá)的可能影響。
　　 目的:
　　 1.體內(nèi)水平探討厄洛替尼和

5、塞來昔布聯(lián)合阻斷表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)所介導(dǎo)的信號(hào)通路后，對(duì)人肺腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響
　　 2.體內(nèi)水平探討厄洛替尼和塞來昔布聯(lián)合阻斷表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)所介導(dǎo)的信號(hào)通路后對(duì)腫瘤血管生成的影響。
　　 3.體內(nèi)水平探討厄洛替尼和塞來昔布聯(lián)合阻斷表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)所介導(dǎo)的信號(hào)通路后對(duì)腫瘤組織BCL-2，Bax，C

6、OX-2，EGFR，p-EGFR表達(dá)的影響
　　 方法:
　　 常規(guī)培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人肺癌細(xì)胞A549接種于裸鼠皮下，成瘤后隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(n=6，1％Tween80)，厄洛替尼組(n=6，30mg/kg/d)，塞來昔布組(n=6，100mg/kg/d)，厄洛替尼塞來昔布聯(lián)合給藥組(n=6，厄洛替尼30mg/kg/d和塞來昔布100mg/kg/d)，每天給予上述相應(yīng)藥物灌胃處理，觀察裸鼠生長(zhǎng)狀況，每周兩次測(cè)量腫瘤大

7、小，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。約40d后處死裸鼠，稱取各處理組移植瘤質(zhì)量。切取移植瘤組織，采用免疫組化檢測(cè)各處理組腫瘤組織的微血管密度(MVD)，Bcl-2、Bax的表達(dá)率，ELISA法檢測(cè)各處理組裸鼠血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(sVEGF)的含量，Western Blot法檢測(cè)各處理組Bcl-2、Bax，EGFR、p-EGFR、COX-2蛋白的表達(dá)情況并計(jì)算Bcl-2/Bax的值。
　　 結(jié)果:
　　 1.聯(lián)合用藥組腫瘤明顯小于塞

8、來昔布組、厄洛替尼組和對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 2.聯(lián)合用藥組微血管數(shù)目、sVEGF的含量明顯小于塞來昔布組、厄洛替尼組和對(duì)照組（P＜0.05）。
　　 3.厄洛替尼組Bcl-2的表達(dá)明顯小于對(duì)照組(P＜0.05)，塞來昔布組Bcl-2的表達(dá)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，聯(lián)合用藥組Bcl-2的表達(dá)與對(duì)照組、塞來昔布組、厄洛替尼組相比均明顯降低(P＜0.05)。Bax的表達(dá)在各組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

9、P＞0.05)。聯(lián)合用藥組Bcl-2/Bax的值較塞來昔布組、厄洛替尼組明顯降低（P＜0.05）。
　　 4.厄洛替尼組、塞來昔布組、聯(lián)合給藥組p-EGFR、COX-2的表達(dá)低于對(duì)照組(P＜0.05)，EGFR的表達(dá)在各組之間差異無顯著意義(P＞0.05)。聯(lián)合給藥組p-EGFR、COX-2的表達(dá)低于.厄洛替尼組、塞來昔布組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 塞來昔布聯(lián)合厄洛替尼相對(duì)厄洛替尼或塞來昔布能更明顯