清心飲對佐劑性關(guān)節(jié)炎心血管損傷的保護作用及部分機制研究.pdf

1、目的：近年來，隨著皮質(zhì)激素、免疫抑制劑治療的應(yīng)用，類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者的生存期得到明顯延長，與此同時心血管并發(fā)癥也逐漸增多。心血管疾病成為RA患者的首要死亡原因。因此探索其發(fā)病機理及防治措施成為RA臨床治療中亟待解決的重要問題之一。本課題擬研究清心飲對佐劑性關(guān)節(jié)炎(adiuvant arthritis，AA)大鼠離體血管內(nèi)皮依賴性舒張功能及其對同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)

2、、血管細胞間粘附分子-1(vascular celladhesion molecule-1，VCAM-1)、內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)表達的影響，研究其血管保護作用機制，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。 方法：選擇體重150-180g的Wistar大鼠，雌雄各半。測量雙側(cè)足爪容積后，

3、于右后足跖部常規(guī)消毒，皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(0.1ml/只)建立AA大鼠模型。其中10只大鼠用相同方法注入等量生理鹽水。造模后第19天將出現(xiàn)二次反應(yīng)的大鼠隨機分為模型組、甲氨喋呤(MTX)組、MTX+清心飲(MTX+QXY)組，每組10只。注入生理鹽水組為空白對照組。當日測量大鼠體重、用自制容積測量儀測量各組大鼠足爪容積。各治療組連續(xù)灌胃給藥(模型組灌胃給予等量生理鹽水)21天，于給藥結(jié)束后第2天測量各組大鼠足爪容積、體重后，3％戊巴比

4、妥麻醉，腹主動脈取血，分別留取血清、血漿。放射免疫法檢測大鼠血漿ET-1，血清TNF-α、IL-1β，ELISA法檢測血清VCAM-1，循環(huán)酶法檢測血清Hcy；取血后立即打開胸腔，取出胸主動脈，分離周圍脂肪及結(jié)締組織，保留血管內(nèi)皮，截取長為3-4mm的主動脈環(huán)，主動脈環(huán)浴皿法檢測內(nèi)皮依賴性舒張功能；剩余部分動脈，經(jīng)固定、脫水、包埋、染色，免疫組織化學(xué)法檢測血管內(nèi)皮細胞VCAM-1的表達。統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS for win

5、dows 13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，所得結(jié)果均以X±S表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。 結(jié)果： 1 QXY對AA大鼠一般情況的影響與模型組比較，MTX組、MTX+QXY組一般情況均有所改善。造模后，模型組、MTX組與MTX+QxY組體重明顯低于空白對照組(P<0.01)，但模型組、MTX組與MTX+QXY組間無差異(P>0.05)；灌胃完畢，模型組、MTX組與MTX+QXY組體重明顯低于空白對照組(P<0.0

6、1)，模型組與MTX組明顯低于MTX+QXY組(P<0.01)，模型組明顯低于MTX組(P<0.01)；MTX、模型組體重增加明顯低于空白對照組(P<0.01)，MTX、模型組體重增加明顯低于MTX+QXY組(P<0.01)，MTX+QXY組體重增加值與空白對照組比較無顯著性差異(P>0.05)，模型組體重增加明顯低于MTX組(P<0.01)。 2 QXY對AA大鼠足爪腫脹的抑制作用給藥3周后，MTX組、MTX+QXY組造模側(cè)足

7、爪平均腫脹度明顯低于模型組(P<0.01)，MTX組與MTX+QXY組比較無明顯差異(P>0.05)，但MTX+QXY組對造模側(cè)腫脹足爪的抑制率稍優(yōu)于MTX組(58.20％VS 54.7％)。(2)MTX組、MTX+QXY組非造模側(cè)平均腫脹度明顯低于模型組(P<0.01)，MTX+QXY組與MTX組比較無顯著差異(P>0.05)，但MTX+QXY組對非造模側(cè)腫脹足爪的抑制率稍優(yōu)于MTX組(48.49％VS 44.20％)。 3

8、 QXY對AA大鼠內(nèi)皮依賴性舒張功能的影響主動脈環(huán)對乙酰膽堿(acetylcholine，Ach)引起的內(nèi)皮依賴性舒張作用(％)各個濃度(10<'-9>mmol/L、10<'-8>mmol/L、10<'-7>mmol/L、10<'-6> mmol/L)中模型組、MTX組、MTX+QXY組均明顯低于空白對照組，差異有顯著性(P<0.01、0.05)，模型組、MTX組明顯低于MTX+QXY組(P<0.01)；從10<'-8>mmol/L開始

9、，模型組明顯低于MTX組，差異有顯著性(P<0.05、0.01)。主動脈環(huán)對硝普鈉(sodiumnitroprusside，NaNP)引起的非內(nèi)皮依賴性舒張作用(％)中前兩個濃度(即10<'-9>mmol/L、10<'-8>mmol/L)各組間存在明顯差異，顯著性水平從0.05到0.01不等，后兩個濃度(10<'-7>mmol/L、10<'-6>mmol/L)各組間均無明顯差異(P>0.05)。 4 QXY對AA大鼠對血清TNF

10、-α、IL-1β，血漿ET-1，血清Hcy，血清及血管內(nèi)皮細胞VCAM-1的影響4.1 血清TNF-α、IL-1β水平比較，模型組、MTX組明顯高于空白對照組(P<0.01)，模型組、MTX組明顯高于MTX+OXV組(P<0.01)，MTX+QXY組與空白對照組比較無明顯差異(P>0.05)，模型組明顯高于MTX組(P<0.01)： 4.2 血漿ET-1水平比較，模型組、MTX組與MTX+QXY組明顯高于空白對照組(P<0.01

11、)，模型組、MTX組明顯高于MTX+QXY組(P<0.05)，模型組與MTX組比較無明顯差異(P>0.05)。 4.3.1 血清VCAM-1水平比較，模型組、MTX組明顯高于空白對照組(P<0.01)，模型組、MTX組明顯高于MTX+QXY組(P<0.01)，MTX+OXY組與空白對照組無顯著差異(P>0.05)，模型組明顯高于MTX組(P<0.01)。 4.3.2 動脈內(nèi)皮細胞VCAM-1(灰度值)比較，模型組、MTX組明顯高

12、于空白對照組，差異有顯著性(P<0.01)，模型組、MTX組明顯高于MTX+QXY組(P<0.05)，模型組明顯高于MTX組，差異有顯著性(P<0.01)，MTX+QXY組與空白對照組比較無明顯差異(P>0.05)。 4.4 血清Hcy水平比較，模型組、MTX組與MTX+QXY組明顯高于空白對照組，差異有顯著性(P<0.01)，模型組、MTX組明顯高于MTX+QXY組，差異有顯著性(P<0.01)，模型組與MTX組比較無明顯差異

13、(P>0.05)。 結(jié)論： 1 AA大鼠血清Hcy、VCAM-1及血漿ET-1水平明顯升高，主動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能明顯下降，說明AA大鼠存在心血管損害的相關(guān)因素。 2 清心飲具有顯著抗炎作用。清心飲聯(lián)合MTX可明顯降低AA大鼠足爪腫脹度及血清炎性細胞因子TNF-α、IL-1β水平。 3 清心飲對AA大鼠血管內(nèi)皮損傷具有保護作用。清心飲可明顯改善AA大鼠主動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能，降低血漿ET-1，血清VC