淡豆豉提取物對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠大血管病變的防治作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:大血管病變是Ⅱ型糖尿病(T2DM)最常見的慢性并發(fā)癥之一,也是T2DM致殘致死的最主要原因。炎性反應(yīng)及高血糖,高胰島素血癥導(dǎo)致的氧化應(yīng)激與NO/NOS體系調(diào)節(jié)紊亂被公認(rèn)為是糖尿病大血管病變發(fā)病的主要可能因素。本課題通過觀察淡豆豉對(duì)高糖高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素所致Ⅱ型糖尿病大鼠血清中相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)及主動(dòng)脈一氧化氮合酶(NOS)mRNA表達(dá)的影響,從整體水平及分子水平多個(gè)方面系統(tǒng)研究其防治糖尿病大血管并發(fā)癥的可能機(jī)制。
　　

2、 方法:健康雄性Wistar大鼠50只,體重180-200 g,高糖高脂飲食+小劑量鏈脲佐菌素(25mg/kg)腹腔注射造成Ⅱ型糖尿病模型。選取血糖值＞7.7 mmol/L的大鼠40只,分為模型對(duì)照組、淡豆豉低劑量組(10 g生藥/kg·d)、淡豆豉高劑量組(20 g生藥/kg·d)及陽性藥羅格列酮組(1.8mg/kg.d),每組10只,另取正常喂養(yǎng)的10只作為正常對(duì)照組。每日灌胃給藥,連續(xù)給藥8周,給藥容量為10 mL/kg。末次給藥

3、后斷頭取血,離心分離血清,分別檢測(cè)空腹血糖(FBG)、血清胰島素(FIN)、一氧化氮超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、6-酮-前列腺素F1σ(6-Keto-PGF1σ),血栓烷(TXB2)及內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)等指標(biāo)?？焖偌羧≈鲃?dòng)脈,剪取最上一段約1 cm用10％甲醛固定,HE(蘇木素-伊紅)染色制作成病理切片;剩余部分-80℃凍存,Trizol法提取總RNA,RT-PCR測(cè)定i

4、NOS,eNOS mRNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(x-)±s表示,用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1對(duì)血糖、胰島素及胰島素敏感指數(shù)的影響
　　 模型對(duì)照組大鼠血糖明顯高于正常對(duì)照組(p＜0.01);各給藥組大鼠血糖均比模型對(duì)照組顯著下降(p＜0.01或p＜0.05)。
　　 模型對(duì)照組大鼠較正常對(duì)照組大鼠胰島素水平明顯升高(p＜0.01),胰島素敏感指數(shù)明顯降低(p＜0.01);各給藥

5、組大鼠的胰島素水平較模型對(duì)照組均顯著降低(p＜0.01),胰島素敏感指數(shù)均顯著升高(p＜0.01)。
　　 2對(duì)血清SOD、MDA的影響
　　 模型對(duì)照組大鼠血清SOD水平較正常對(duì)照組大鼠明顯降低(p＜0.01),血清MDA水平明顯升高(p＜0.01);與模型對(duì)照組相比,各給藥組大鼠血清SOD水平均顯著升高(p＜0.01或p＜0.05),血清MDA水平均顯著降低(p＜0.01或p＜0.05)。
　　 3對(duì)TNF-

6、α的影響
　　 模型對(duì)照組大鼠血清TNF-α水平較正常對(duì)照組顯著升高(p＜0.01);各給藥組大鼠的血清TNF-α水平較模型對(duì)照組均明顯降低(p＜0.01)。
　　 4對(duì)6-Keto-PGF1σ和TXB2的影響
　　 模型對(duì)照組大鼠較正常對(duì)照組大鼠血清6-Keto-PGF1σ水平顯著降低(p＜0.01),血清TXB2水平明顯升高(p＜0.01),TXB2/6-Keto-PGF1σ值明顯升高(p＜0.01);各給藥

7、組大鼠較模型對(duì)照組大鼠血清6-Keto-PGF1σ水平均明顯升高(p＜0.01或p＜0.05),血清TXB2水平均明顯降低(p＜0.01),TXB2/6-Keto-PGF1σ值也均顯著降低(p＜0.01)。
　　 5對(duì)血清ET-1的影響
　　 與正常對(duì)照組大鼠相比,模型組對(duì)照大鼠的血清ET-1水平顯著升高(p＜0.01);與模型對(duì)照組大鼠相比,各給藥組血清ET-1水平均明顯降低(p＜0.01)。
　　 6對(duì)血清N

8、O的影響
　　 模型對(duì)照組大鼠血清NO水平較正常對(duì)照組大鼠顯著升高(p＜0.01);與模型對(duì)照組相比,各給藥組大鼠血清NO水平均明顯降低(p＜0.01)。
　　 7對(duì)主動(dòng)脈形態(tài)的影響
　　 光鏡可見:正常對(duì)照組:血管內(nèi)膜連續(xù)完整而光滑,中膜平滑肌走行清晰,無增生;模型對(duì)照組:內(nèi)膜粗糙不光滑,內(nèi)皮明顯缺失,可見多個(gè)炎細(xì)胞粘附,中膜平滑肌細(xì)胞增生活躍,細(xì)胞數(shù)目增多,部分胞核肥大;淡豆豉提取物低劑量組:內(nèi)膜粗糙不光滑,

9、內(nèi)皮缺失,可見多個(gè)炎細(xì)胞粘附,中膜平滑肌細(xì)胞增生明顯,中膜淺層可見細(xì)胞數(shù)目增多;淡豆豉提取物高劑量組:內(nèi)膜較模型組光滑,可見多數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞,內(nèi)膜局部粗糙,細(xì)胞核增多,中膜平滑肌細(xì)胞增生較輕;陽性藥組:內(nèi)膜較模型組明顯光滑,內(nèi)皮連續(xù),內(nèi)膜局部輕微增生,中膜平滑肌細(xì)胞增生較輕。
　　 8對(duì)主動(dòng)脈iNOS,eNOS mRNA表達(dá)的影響
　　 與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組iNOS mRNA表達(dá)明顯升高(p＜0.01);與模型對(duì)照組

10、比較,各給藥組主動(dòng)脈iNOS mRNA表達(dá)均顯著降低(p＜0.01)。
　　 各給藥組eNOS mRNA表達(dá)比模型對(duì)照組有升高趨勢(shì)但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 結(jié)論:淡豆豉可降低高糖高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素導(dǎo)致的Ⅱ型糖尿病大鼠的血糖及胰島素水平,緩解該模型大鼠主動(dòng)脈損傷。其機(jī)制可能為:
　　 1提高該模型大鼠抗氧化能力,緩解其氧化應(yīng)激損傷;
　　 2減少炎性因子TNF-α的釋放,緩解其炎性損傷