發(fā)育期給予DNA甲基化抑制劑對成年小鼠行為學影響及機制的研究.pdf

1、第一部分：發(fā)育期給予DNA甲基化抑制劑對成年小鼠行為學影響及機制的研究
　　目的：通過研究發(fā)育期小鼠給予DNA甲基化抑制劑5-Aza對其成年后行為學影響及機制，闡明發(fā)育期DNA甲基化模式的變化對神經發(fā)育的影響及其在神經精神疾病發(fā)生中的作用。
　　方法：通過曠場實驗、明暗探索實驗、高架十字迷宮實驗及懸尾實驗研究發(fā)育期給予DNA甲基化抑制劑5-Aza對成年小鼠行為學的影響；并測定各組試驗鼠的腦重與體重比；采用Brdu免疫熒光化學

2、法測定海馬齒狀回細胞增殖情況；ELISA法測定小鼠腦內BDNF、5-HT及NE的蛋白水平；RT-PCR法測定腦內BDNF、5-HT1Ar、5-HT2Ar、NET、p53及Gadd45αmRNA表達水平；Westernblot測定腦內p53及Gadd45α蛋白表達情況，通過以上方法研究闡明發(fā)育期給予DNA甲基化抑制劑5-Aza對小鼠神經發(fā)育影響及機制。
　　結果：與對照組相比，在曠場實驗中5-Aza組小鼠水平運動的距離及垂直站立的次

3、數均降低(P<0.01)；在明暗探索實驗中，5-Aza組小鼠在明場的停留時間延長，穿梭次數增加(P<0.01)；在高架十字迷宮實驗中，5-Aza組小鼠在封閉臂的活動時間降低，而在開放臂的活動時間延長(P<0.01)；在懸尾實驗中，5-Aza組小鼠的累積不動時間增加(P<0.01)。研究還表明，5-Aza組小鼠的腦重與體重比降低(P<0.01)；5-Aza組小鼠海馬齒狀回部位Brdu陽性細胞數量及細胞密度較對照組降低。ELISA結果顯示，

4、給予5-Aza后，BDNF在海馬部位的表達水平較對照組減少(P<0.01)，而在前額葉皮層的表達較對照組增加(P<0.01)；5-HT在前額葉皮層、紋狀體及海馬部位的表達水平較對照組降低(P<0.01)；NE在前額葉皮層及海馬部位的表達水平較對照組減少(P<0.01)；RT-PCR結果表明，給予5-Aza后，BDNF在海馬部位的mRNA表達水平較對照組減少，而在前額葉皮層處的表達較對照組增加(P<0.01)；5-HT1Ar及5-HT2A

5、r在前額葉皮層、紋狀體及海馬部位的mRNA表達水平較對照組減少(P<0.01)；NET在紋狀體及海馬部位的mRNA表達水平較對照組增加(P<0.01)；p53及Gadd45α在前額葉皮層及紋狀體部位的mRNA表達水平較對照組均降低(P<0.01)；Western blot結果表明，5-Aza組小鼠腦內p53及Gadd45α表達水平與對照組相比增高(P<0.05)。
　　結論：發(fā)育期給予DNA甲基化抑制劑5-Aza能引起成年小鼠躁狂

6、抑郁樣行為；5-Aza引起小鼠行為學的異?？赡苁峭ㄟ^改變BDNF、5-HT1Ar、5-HT2Ar、NET、p53和Gadd45α等基因甲基化模式，影響其表達水平，從而抑制神經發(fā)生，引起神經精神異常。
　　第二部分：DNA甲基化抑制劑5-Aza對體外培養(yǎng)神經干細胞增殖的影響
　　目的：研究DNA甲基化抑制劑5-Aza對體外培養(yǎng)神經干細胞(neural stemcells，NSCs)增殖的影響，闡明DNA甲基化在NSCs增殖過程

7、中的調節(jié)作用，進一步明確DNA甲基化模式的變化對神經發(fā)生的影響及機制。
　　方法：采用無血清懸浮培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)新生小鼠腦NSCs，以PBS作為對照，分別給予5、10、20μmol/L的5-Aza進行處理，通過MTT法檢測NSCs的增殖情況；采用流式細胞術分別測定NSCs的細胞周期及凋亡情況。
　　結果：研究結果表明，5-Aza組NSCs增殖能力較對照組降低(P<0.01)；細胞周期測定結果顯示，5-Aza組NSCsG0/G