氧化應激在羅哌卡因所致大鼠脊髓神經毒性中的作用及其機制.pdf

1、目的：觀察大鼠鞘內間斷注射1％的羅哌卡因12h后，第1天，第3天，第5天，第7天，第14天，第28天脊髓氧化應激，神經毒性及ERK1表達的情況，以及應用抗氧化劑TEMPOL后的變化，以探討氧化應激損傷對羅哌卡因的脊髓神經毒性的影響及其機制。
　　 方法：雄性SD大鼠144只采用腰段鞘內置管法在蛛網膜下腔內置入PE10導管至脊髓腰膨大，隨機分為4組：S組(假手術組)，N組(對照組)，R組(羅哌卡因組)，T組(TEMPOL組)。S組

2、只置管不給藥；N組(對照組)經PE10導管注入生理鹽水0.12μL，/g，每間隔1.5h1次，共8次；R組(羅哌卡因組)注入1.0％羅哌卡因0.12μL/g，每間隔1.5 h1次，共8次；T組(TEMPOL組)先注入羅哌卡因，方法同R組，最后一次羅哌卡因注射完后4h，8h，12h，24h，48h，72h分別注入TEMPOL5μL(380 nmol)。各組均觀察1d、3d、5d、7d、14d、28d后取材。S組記為“S1組、S3組、S5組

3、、S7組、S14組、S28組”。N組記為“N1組、N3組、N5組、N7組、N14組、N28組”。R組記為“R1組、R3組、R5組、R7組、R14組、R28組”。T組記為“T1組、T3組、T5組、T7組、T14組、T28組”。(n=6)注藥前1天和羅哌卡因注射完成后1.5 h，第1天，第3天，第5天，第7天，第14天，第28天測定雙后肢熱刺激回縮閾值、機械刺激回縮閾值。處死大鼠，取脊髓腰膨大組織，HE染色觀察脊髓組織形態(tài)學改變，TUNEL

4、染色法檢測細胞凋亡，免疫組化法測定ERK1的表達，MDA含量和SOD活性測定檢測ROS水平。
　　 結果：⑴1％羅哌卡因間斷鞘內注射后1.5h大鼠出現雙后肢痛閾較N組和S組明顯上升，并于第1天達到最高值，此后痛域值逐漸下降，但仍高于N組和S組，直至第28天痛域恢復至N組水平(P<0.05)。與R組相比，T組在1-3天痛閾值明顯降低，此后各時間點痛域值均低于R組(P<0.05)，至第28天無明顯差異。⑵S組和N組HE染色脊髓未出現

5、明顯病理改變，R組在1-3天出現脊髓神經元變性和凋亡，此后損傷持續(xù)發(fā)展凋亡細胞逐漸增多，甚至出現部分細胞壞死，直至14天病變減輕，凋亡細胞減少。與R組比較，T組早期正常神經元數量較多，凋亡細胞較少，有個別細胞壞死，第14天大部分神經細胞正常，僅可見少量凋亡細胞，第28天脊髓神經細胞形態(tài)基本正常。⑶與N組相比，R1，R3，R5組和T1，T3，T5組TUNEL染色陽性細胞明顯增多，此后逐漸減少但明顯多于于N組(P<0.05)；與R組相比，T

6、3組明顯減少，此后T組陽性細胞數均少于R組(P<0.05)。⑷與N組相比，R1，R3組和T1，T3組ERK1表達明顯增高，逐漸降低，但仍明顯高于N組(P<0.05)，直至術后第28天恢復至N組水平(P>0.05)。與R相比，T3組ERK1表達明顯降低，此后T組的表達均少于R組(P<0.05)，直至第14天，與R組的表達無明顯差異(P>0.05)。⑸與N組比較，R1，R3，R5組和T1，T3，T5，T7組MDA含量明顯增多，此后逐漸減少，

7、但R組仍明顯高于N組(P<0.05)。與R相比，T3組MDA含量明顯降低，此后各時間點的含量均少于R組(P<0.05)。與N組比較，R1，R3，R5組和T1，T3，T5，T7組SOD總活力增高，此后逐漸減少，但仍明顯高于N組(P<0.05)。與R相比，T3組SOD總活力明顯增高，此后各時間點的活力均高于R組(P<0.05)。
　　 結論：①間斷鞘內注射1％羅哌卡因12h后大鼠脊髓的ROS水平明顯升高，大鼠痛域值升高，脊髓神經元發(fā)