IL-2預孵育同種異基因淋巴細胞抑制MHC完全不相合小鼠急性GVHD的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立非清髓性過繼性植入同種異基因淋巴細胞小鼠的模型,探討小劑量IL-2預孵育同種異基因淋巴細胞后對受鼠急性GVHD的影響,以及過繼性植入IL-2預孵育后的淋巴細胞的GVT效應。
   方法:
   1、為探索非致死性的非清髓性的預處理劑量,給予受鼠雌性BALB/C兩種不同劑量137Se TBI預處理——7Gy和5Gy;
   2、將受鼠分為A、B、C、D、E共5組(n=12),給予非致死性非清髓性的預處理后

2、分別過繼性植入雄性C57BL/6N脾淋巴細胞5×107、1×107和雄性BALB/C×C57BL/6N→F1脾淋巴細胞0.5×107、1×107、5×107(個/只)。對存活時間超過21天的受鼠在不同時間點用PCR檢測供者淋巴細胞嵌合體,觀察受鼠生存時間和急性GVHD的癥狀;
   3、受鼠為雌性BALB/C,預處理為137Se TBI5GY,供鼠為雄性C57BL/6N。每只受鼠均腹腔注射供鼠脾淋巴細胞3×107個,受鼠分為A(

3、直接植入供鼠淋巴細胞)、B(植入的淋巴細胞經(jīng)過終濃度為50 U/ml l的IL-2預孵育4小時)、C(植入的淋巴細胞先與滅活的BALB/C脾淋巴細胞反應72小時再植入)、D(植入的淋巴細胞先經(jīng)過終濃度為50 U/ml的IL-2預孵育4小時,然后與滅活的BALB/C脾淋巴細胞混合淋巴細胞反應72小時再植入)共4組(n=9)。觀察期為60天,觀察受鼠生存時間和急性GVHD的癥狀,死亡受鼠均行肝臟和小腸的病理檢查了解急性GVHD的病理改變情況

4、。觀察期結束時取每只小鼠脾細胞檢測嵌合體,取肝臟和小腸行病理檢查,了解急性GVHD的病理改變:
   4、受鼠為雌性BALB/C,預處理為137Se TBI5GY,供鼠為雄性C57BL/6N。受鼠分為兩組,A組為對照組(n=9):僅在受鼠右側腹股溝種植5×104個4T1乳腺癌細胞株;B組為實驗組(n=9):受鼠不僅在右側腹股溝種植5×104個4T1乳腺癌細胞株,而且還腹腔注射3×107個IL-2預孵育后的C57BL/6N淋巴細胞

5、(植入的淋巴細胞先經(jīng)過終濃度為50 U/ml的IL-2預孵育4小時,然后與滅活的BALB/C脾淋巴細胞混合淋巴細胞反應72小時再植入)。
   結果:
   1、56y為非致死性的非清髓性的預處理劑量;
   2、TBI為5Gy的免疫抑制后,在受鼠保留自身造血的情況下,過繼性同種異基因淋巴細胞可以植活。在MHC完全不相合以及半相合的兩類移植中均有急性GVHD發(fā)生,MHC完全不相合(A組)植活后小鼠可發(fā)生致死性急性

6、GVHD,半相合(E組)急性GVHD明顯減輕。MHC分子半相合的植活率(D組)比完全不相合的(B組)高,植活時間長;在半相合的植入模型中植入的細胞量越多,植活率越高,植活時間逐漸延長;
   3、IL-2(50 U/ml)預孵育同種異基因淋巴細胞4小時后,然后與滅活后的BALB/C脾淋巴細胞混合反應72小時,再過繼性植入后其急性GVHD的發(fā)生強度明顯減輕;
   4、B組受鼠的4T1乳腺癌細胞株的發(fā)生時間明顯延長,雖然生

7、存時間有延長,但是沒有統(tǒng)計學意義。
   結論:TBI為5Gy的免疫抑制后同種異基因淋巴細胞的過繼性植入可以顯著增加嵌合體陽性比例,并且保留受鼠自身造血。縮小供受者MHC分子的差異,適當增加供者淋巴細胞的數(shù)量對獲得穩(wěn)定的同種異基因淋巴細胞嵌合體以及避免致死性急性GVHD出現(xiàn)具有實際意義。小劑量的IL-2預孵育同種異基因的淋巴細胞后,可以明顯減輕過繼性植入后急性GVHD的發(fā)生。其機制與小劑量IL-2預孵育異基因淋巴細胞上調SOCS

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