供者自然殺傷細(xì)胞輸注及IL-2、IL-15治療在異基因及單倍型相合造血干細(xì)胞移植中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文供者自然殺傷細(xì)胞輸注及IL2、IL15治療在異基因及單倍型相合造血干細(xì)胞移植中作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陳廣華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：吳德沛20090501供者自然殺傷細(xì)胞輸注及幾2、幾15治療在異基因及單倍型相合造血干細(xì)胞移植中作用的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要10x106個(gè)骨髓細(xì)胞重建造血。在能重建造血的基礎(chǔ)上建立aGVHD模型，輸注BMCs基礎(chǔ)上輸注5x106、10x106或20x106個(gè)脾細(xì)胞。67周齡SP

2、F級(jí)BALB／C小鼠尾靜脈接種1x106個(gè)EL9611細(xì)胞。接種8天后分組：無(wú)TBI對(duì)照、TBI對(duì)照、同基因BMT對(duì)照、異基因BMT組，每組8只。結(jié)果：接受6Gy劑量的小鼠全部生存。接受7GyTBI預(yù)處理的小鼠中位生存期為280天，33天內(nèi)全部死亡。8GyTBI預(yù)處理的小鼠中位生存期為127天，15天內(nèi)全部死亡。四組生存時(shí)間采用Logrank檢驗(yàn)，9f=4724，P00001。輸注25x106骨髓細(xì)胞不能全部重建造血，100天生存率分別

3、為625％，其余死于內(nèi)臟出血。輸注5x106骨髓細(xì)胞可全部重建造血，100天生存率為100％。單純輸注骨髓細(xì)胞不能誘發(fā)aGVHD。低劑量脾細(xì)胞輸注小鼠aGVHD疾病程度輕未出現(xiàn)aGVHD相關(guān)死亡，中劑量脾細(xì)胞輸注小鼠25％出現(xiàn)aGVHD相關(guān)死亡，高劑量脾細(xì)胞輸注小鼠41天內(nèi)100％死于aGVHD。單純TBI處理組小鼠處理后14天內(nèi)全部死于造血衰竭。同基因?qū)φ招∈?0天內(nèi)全部死于白血病。異基因BMT組1／8只小鼠長(zhǎng)期生存，7／8只小鼠于B

4、MT后45天內(nèi)死于白血病復(fù)發(fā)。四組生存時(shí)間采用Logrank檢驗(yàn)，f2=4022，P00001。28d夕b周血細(xì)胞及脾細(xì)胞均達(dá)到完全供者嵌合體狀態(tài)。結(jié)論：TBI8Gy對(duì)于BALB／c小鼠是清髓性預(yù)處理。預(yù)處理后輸注輸注5x106個(gè)骨髓細(xì)胞可全部重建造血。輸注5x106個(gè)脾細(xì)胞可誘發(fā)輕至中度aGVHD，不出現(xiàn)致死性aGVHD。移植前8天尾靜脈接種1x106個(gè)EL9611白血病細(xì)胞可成功建立白血病微小殘留病模型。三、供者NK細(xì)胞輸注及IL2

5、、IL15治療對(duì)異基因造血干細(xì)胞移植后GVHD、白血病復(fù)發(fā)和免疫重建的影響目的：探討體外培養(yǎng)擴(kuò)增的供者NK細(xì)胞輸注及IL一2、IL15治療對(duì)異基因造血干細(xì)胞移植后GVHD、白血病復(fù)發(fā)和淋系免疫重建的影響。方法：采用臨床GVHD積分方法評(píng)價(jià)小鼠GVHD嚴(yán)重程度；定量PCR方法檢測(cè)脾細(xì)胞sjTREC評(píng)價(jià)胸腺輸出功能；RTPCR方法檢測(cè)T細(xì)胞受體13鏈譜型；流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋系重建；外周血涂片瑞氏染色檢測(cè)白血病復(fù)發(fā)。在GVHD模型中40只小鼠隨