供者自然殺傷細胞輸注及IL-2、IL-15治療在異基因及單倍型相合造血干細胞移植中作用的實驗研究.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文供者自然殺傷細胞輸注及IL2、IL15治療在異基因及單倍型相合造血干細胞移植中作用的實驗研究姓名：陳廣華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：吳德沛20090501供者自然殺傷細胞輸注及幾2、幾15治療在異基因及單倍型相合造血干細胞移植中作用的實驗研究中文摘要10x106個骨髓細胞重建造血。在能重建造血的基礎(chǔ)上建立aGVHD模型，輸注BMCs基礎(chǔ)上輸注5x106、10x106或20x106個脾細胞。67周齡SP

2、F級BALB／C小鼠尾靜脈接種1x106個EL9611細胞。接種8天后分組：無TBI對照、TBI對照、同基因BMT對照、異基因BMT組，每組8只。結(jié)果：接受6Gy劑量的小鼠全部生存。接受7GyTBI預(yù)處理的小鼠中位生存期為280天，33天內(nèi)全部死亡。8GyTBI預(yù)處理的小鼠中位生存期為127天，15天內(nèi)全部死亡。四組生存時間采用Logrank檢驗，9f=4724，P00001。輸注25x106骨髓細胞不能全部重建造血，100天生存率分別

3、為625％，其余死于內(nèi)臟出血。輸注5x106骨髓細胞可全部重建造血，100天生存率為100％。單純輸注骨髓細胞不能誘發(fā)aGVHD。低劑量脾細胞輸注小鼠aGVHD疾病程度輕未出現(xiàn)aGVHD相關(guān)死亡，中劑量脾細胞輸注小鼠25％出現(xiàn)aGVHD相關(guān)死亡，高劑量脾細胞輸注小鼠41天內(nèi)100％死于aGVHD。單純TBI處理組小鼠處理后14天內(nèi)全部死于造血衰竭。同基因?qū)φ招∈?0天內(nèi)全部死于白血病。異基因BMT組1／8只小鼠長期生存，7／8只小鼠于B

4、MT后45天內(nèi)死于白血病復(fù)發(fā)。四組生存時間采用Logrank檢驗，f2=4022，P00001。28d夕b周血細胞及脾細胞均達到完全供者嵌合體狀態(tài)。結(jié)論：TBI8Gy對于BALB／c小鼠是清髓性預(yù)處理。預(yù)處理后輸注輸注5x106個骨髓細胞可全部重建造血。輸注5x106個脾細胞可誘發(fā)輕至中度aGVHD，不出現(xiàn)致死性aGVHD。移植前8天尾靜脈接種1x106個EL9611白血病細胞可成功建立白血病微小殘留病模型。三、供者NK細胞輸注及IL2

5、、IL15治療對異基因造血干細胞移植后GVHD、白血病復(fù)發(fā)和免疫重建的影響目的：探討體外培養(yǎng)擴增的供者NK細胞輸注及IL一2、IL15治療對異基因造血干細胞移植后GVHD、白血病復(fù)發(fā)和淋系免疫重建的影響。方法：采用臨床GVHD積分方法評價小鼠GVHD嚴重程度；定量PCR方法檢測脾細胞sjTREC評價胸腺輸出功能；RTPCR方法檢測T細胞受體13鏈譜型；流式細胞儀檢測淋系重建；外周血涂片瑞氏染色檢測白血病復(fù)發(fā)。在GVHD模型中40只小鼠隨