ALA-PDT對同種異基因小鼠骨髓移植后GVHD及GVL影響的初步研究.pdf

1、同種異基因造血干細胞移植由于供受者的組織相容性白細胞抗原（histocompatibility Leukocyte antigen,HLA）不同，在移植后極易引發(fā)移植物抗宿主病（graftversus host diseases, GVHD）。做為一種免疫反應，它可累及全身多個組織和器官，嚴重危害患者的生命健康。 但如果完全去除這些導致GVHD 的移植物中的淋巴細胞，又會大大增加腫瘤復發(fā)的風險。因此，如何解決這一棘手問題，是目前

2、移植治療領域的研究熱點。 光動力治療（photodynamic therapy，PDT)方法目前已經成為一種全新的腫瘤生物治療方法。PDT 的基本原理是：光敏劑與腫瘤組織具有較高的親和力，當給予一定波長的光照后，可發(fā)生一系列光化學反應，產生單態(tài)氧以及其他活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產物來殺傷腫瘤細胞。目前PDT主要應用在實體瘤和皮膚疾病的治療領域,在造血干細胞移植治療血液系統(tǒng)惡性疾病方面的研

3、究甚少。在移植物中，那些引起GVHD 的T 淋巴細胞也可以類似腫瘤細胞一樣聚集光敏劑，因此，PDT 可以有效地清除這部分T 淋巴細胞，來提高移植成功率。而移植物中還有一類T 淋巴細胞，它們并不起介導GVHD 的作用，PDT對它們似乎也沒有影響，它們還可能在受者體內起到一定的對抗腫瘤細胞的作用。如果將移植物中這類有益的T淋巴細胞保留下來，就有可能減少腫瘤的復發(fā)。 本研究使用光敏劑氨基乙酰丙酸（aminolevulinicacid，

4、ALA）對移植物進行處理，旨在探討ALA－PDT 在異基因骨髓移植（ allogenic bone marrowtransplantation，allo-BMT）中的作用機制，是否在減輕GVHD 的同時保留一部分移植物抗白血病效應（Graftversus leukemia，GVL）。 主要研究如下： 1．確定小鼠淋巴細胞體外培養(yǎng)時rhIL-2、PHA 的最佳濃度取小鼠的脾臟，利用Ficoll-Hypaque 密度梯度離心

5、法分離淋巴細胞。并分別加入rhIL-2、PHA 培養(yǎng)5d,經MTT 法檢測確定PHA、rhIL-2 的最佳濃度分別為：40μg/ml、25 U/ml。 2．確定絲裂霉素去增值的最佳濃度在受鼠的淋巴細胞中按照終濃度（μg/ml）10、20、25、30、40、50加入絲裂霉素培養(yǎng)5 d，經MTT 法檢測確定25 μg/ml 絲裂霉素為最佳的實驗濃度。 3．制備單向混合淋巴細胞，確定混合細胞比例將刺激細胞（受鼠淋巴細胞）和反應

6、細胞（供鼠淋巴細胞）按濃度比為2：1、1：1、1：2 進行混合培養(yǎng)，用MTT 法檢測細胞的殺傷效果，確定最佳的混合淋巴細胞比例2：1 作為混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture，MLC）的濃度。 4．ALA-PDT 選擇性清除同種異基因小鼠激活的淋巴細胞的ALA 濃度在單向混合淋巴細胞中分別加入1.5、2.0、2.5 mmol/L ALA,培養(yǎng)4 h，然后給予一定波長光照射后，加入刺激細胞繼續(xù)培養(yǎng)。應

7、用MTT 法計算單向混合淋巴細胞對刺激細胞的殺傷率。在加入1.5 mmol/L ALA時單向混合淋巴細胞對刺激細胞的殺傷率最低。 5．ALA-PDT 減輕同種異基因小鼠骨髓移植后aGVHD反應將經過ALA-PDT 處理過的單向混合淋巴細胞及供鼠的3×107/ml 骨髓細胞共計0.5 ml，經尾靜脈輸注到經8.5 Gy 60Co 照射的受鼠體內。與對照組相比，受鼠的一般情況、外周血WBC 增加情況、GVHD 反應程度、細胞植入情況

8、均有所改善。 6．ALA-PDT 減輕急性淋巴細胞白血病（ acutelymphoblastic leukemia，ALL）小鼠同種異基因骨髓移植后GVHD反應，并且保留了GVL效應將經過ALA-PDT處理過的單向混合淋巴細胞聯(lián)合供鼠的骨髓細胞輸注給ALL小鼠體內，ALL受鼠的體重增長情況、造血功能恢復情況及無病生存時間等指標明顯好于對照組。 根據以上的結果，得到如下的結論：（1）ALA-PDT 能夠選擇性清除小鼠同種異