神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:建立神經(jīng)病理性疼痛及假手術(shù)對(duì)照組大鼠腰段脊髓組織雙向凝膠電泳圖譜，比較分析神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓組織中蛋白質(zhì)組的變化和差異表達(dá)，鑒定出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　方法:成年雄性SD大鼠，體重260～320g，建立坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)致神經(jīng)病理性疼痛模型，隨機(jī)分為2組:假手術(shù)組（Sham組，n=6），CCI致神經(jīng)病理性疼痛組（CCI組，n=6）;Sham組僅暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)分支，不結(jié)扎。所有大鼠均測(cè)基礎(chǔ)痛閾值，并在第3天、

2、5天、7天時(shí)測(cè)定大鼠右后爪機(jī)械痛閾值(PMWT)。7天后處死大鼠，取腰段脊髓組織蛋白以固相pH梯度等電聚焦(IEF)為第一向，SDS-PAGE垂直電泳為第二向進(jìn)行雙向凝膠電泳(2-DE)，應(yīng)用PDQuest分析軟件對(duì)考馬斯亮藍(lán)染色的2-DE圖譜進(jìn)行圖像分析，對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF MS質(zhì)譜鑒定分析，并利用Mascot查詢軟件搜索Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　結(jié)果:假手術(shù)對(duì)照組大鼠和慢性坐骨神經(jīng)縮

3、窄性損傷致神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓組織雙向電泳圖譜中各分離出清晰的約1000個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，2-DE圖譜中分離出明顯差異表達(dá)的蛋白有38個(gè)，其中33個(gè)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，5個(gè)蛋白表達(dá)顯著下調(diào)。選取了21個(gè)豐度較高、分辨清楚的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF MS質(zhì)譜鑒定分析，共獲得21個(gè)肽質(zhì)量指紋圖譜。利用Mascot查詢軟件搜索Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)，共搜索到16個(gè)蛋白質(zhì)。生物信息學(xué)分析初步鑒定的蛋白質(zhì)為:熱休克蛋白、分子伴侶蛋白(

4、heat shock protein70，HSP70熱休克蛋白70)，抗氧化蛋白（Peroxiredoxin-1蛋白），神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP膠質(zhì)原纖維酸性蛋白;Neurofilament medium polypeptide，NEFM牛神經(jīng)纖維介質(zhì)多肽），信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白(Guanine nucleotide-binding protein，G-蛋白鳥(niǎo)苷酸結(jié)合

5、蛋白;Annexin A3，膜聯(lián)蛋白A3)，突觸相關(guān)蛋白(Synaptosomal-associated protein，SNAP)，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)相關(guān)蛋白(Serum albumin，血清白蛋白)，能量代謝酶類相關(guān)蛋白（Aconitate hydratase，烏頭酸水合酶;Malate dehydrogenase，蘋果酸脫氫酶;6-phosphogluconolactonase，6-磷酸葡萄糖脫氫酶;Carbonyl reductas