神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓組織的比較蛋白質組學研究.pdf

1、目的:建立神經(jīng)病理性疼痛及假手術對照組大鼠腰段脊髓組織雙向凝膠電泳圖譜，比較分析神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓組織中蛋白質組的變化和差異表達，鑒定出差異表達的蛋白質點。
　　方法:成年雄性SD大鼠，體重260～320g，建立坐骨神經(jīng)結扎(CCI)致神經(jīng)病理性疼痛模型，隨機分為2組:假手術組（Sham組，n=6），CCI致神經(jīng)病理性疼痛組（CCI組，n=6）;Sham組僅暴露右側坐骨神經(jīng)分支，不結扎。所有大鼠均測基礎痛閾值，并在第3天、

2、5天、7天時測定大鼠右后爪機械痛閾值(PMWT)。7天后處死大鼠，取腰段脊髓組織蛋白以固相pH梯度等電聚焦(IEF)為第一向，SDS-PAGE垂直電泳為第二向進行雙向凝膠電泳(2-DE)，應用PDQuest分析軟件對考馬斯亮藍染色的2-DE圖譜進行圖像分析，對差異蛋白質點進行MALDI-TOF MS質譜鑒定分析，并利用Mascot查詢軟件搜索Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫進行生物信息學分析。
　　結果:假手術對照組大鼠和慢性坐骨神經(jīng)縮

3、窄性損傷致神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓組織雙向電泳圖譜中各分離出清晰的約1000個蛋白質點，2-DE圖譜中分離出明顯差異表達的蛋白有38個，其中33個蛋白表達顯著上調，5個蛋白表達顯著下調。選取了21個豐度較高、分辨清楚的差異蛋白質點進行MALDI-TOF MS質譜鑒定分析，共獲得21個肽質量指紋圖譜。利用Mascot查詢軟件搜索Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫，共搜索到16個蛋白質。生物信息學分析初步鑒定的蛋白質為:熱休克蛋白、分子伴侶蛋白(

4、heat shock protein70，HSP70熱休克蛋白70)，抗氧化蛋白（Peroxiredoxin-1蛋白），神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞特異蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP膠質原纖維酸性蛋白;Neurofilament medium polypeptide，NEFM牛神經(jīng)纖維介質多肽），信號轉導蛋白(Guanine nucleotide-binding protein，G-蛋白鳥苷酸結合

5、蛋白;Annexin A3，膜聯(lián)蛋白A3)，突觸相關蛋白(Synaptosomal-associated protein，SNAP)，細胞內環(huán)境穩(wěn)態(tài)相關蛋白(Serum albumin，血清白蛋白)，能量代謝酶類相關蛋白（Aconitate hydratase，烏頭酸水合酶;Malate dehydrogenase，蘋果酸脫氫酶;6-phosphogluconolactonase，6-磷酸葡萄糖脫氫酶;Carbonyl reductas