海洋放線菌XS904的鑒定、抗菌物質(zhì)的發(fā)酵特性及其性質(zhì)研究.pdf

1、自Flemming發(fā)現(xiàn)青霉素以來，相繼己有350多種抗生素應(yīng)用于臨床，給人類的健康帶來了福音。但隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌耐藥性也日趨嚴(yán)重，人們必須不斷尋找新的藥源。新藥的開發(fā)已突破陸生資源的束縛，拓展到生態(tài)和物種遠(yuǎn)比陸地復(fù)雜多樣的海洋，獨特的海洋環(huán)境使海洋微生物在物種、基因組成和生態(tài)功能上呈現(xiàn)較高的多樣性，被譽(yù)為天然藥物的資源“寶庫”。目前，海洋微生物已成為世界各國開發(fā)新型藥物的熱點領(lǐng)域。
　　 本文以從寧波海域灘涂泥樣中分離

2、得到的具有抗菌活性的XS904菌株為研究對象，對其進(jìn)行分類地位、發(fā)酵液抗菌物質(zhì)理化性質(zhì)、發(fā)酵過程生化特性、培養(yǎng)基優(yōu)化和抗菌物質(zhì)分離純化等方面進(jìn)行了研究，結(jié)果如下：
　　 綜合形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征等在內(nèi)的多相分類結(jié)果，初步將XS904菌株的分類地位確定為灰淺紅鏈霉菌的一個亞種。
　　 XS904菌株所產(chǎn)抗菌物質(zhì)對G+細(xì)菌具有很強(qiáng)的抑制作用，在酸、中性條件下穩(wěn)定，對溫度敏感，易被三氯甲烷萃取，能溶于水、甲醇、乙醇

3、等溶劑，紙層析初步鑒定為一類堿性抗生素。
　　 利用搖瓶發(fā)酵試驗研究了XS904菌株分批發(fā)酵過程中菌體干重、總糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)、pH和抑菌圈的變化情況，利用Origin7.5軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性回歸擬合，建立了菌體生長、底物(總糖)消耗代謝和抑菌圈動力學(xué)模型，得到了菌體干重、總糖濃度、抑菌圈在發(fā)酵過程中的變化規(guī)律，擬合曲線95％預(yù)測區(qū)間分析結(jié)果表明，該模型能很好地反映XS904菌株分批發(fā)酵過程。
　　 利用單因素、

4、部分析因設(shè)計和響應(yīng)面分析法對XS904菌株培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，確定了與XS904菌株產(chǎn)抗菌物質(zhì)有關(guān)的3個主要因素依次為海水晶、淀粉和酵母膏，通過響應(yīng)面分析法確定了主要影響因子的最佳條件為：海水晶42.93g/L、淀粉11.28g/L、酵母膏3.75g/L。經(jīng)驗證在此條件下發(fā)酵液抑菌圈由最初的22.72mm提高到25.60mm。
　　 采用大孔吸附樹脂對發(fā)酵液進(jìn)行靜態(tài)吸附研究表明：大孔吸附樹脂具有很好的脫鹽效果；隨著樹脂用量增加，色素

5、和抗菌物質(zhì)的吸附效果有所提高。樹脂SP-700對色素吸附符合Freundlich方程，該吸附過程是一個放熱過程，降低溫度有利于色素的吸附；動態(tài)吸附顯示樹脂SP-700對色素和抗菌物質(zhì)均有較大的吸附量。發(fā)酵液抗菌物質(zhì)經(jīng)三氯甲烷萃取、樹脂SP-700和Sephadex LH-20分離后，活性部分進(jìn)行紫外掃描顯示有四個峰，取其中250nm吸收峰部分進(jìn)行HPLC分析，250nm檢測只顯示一個吸收峰。說明用大孔吸附樹脂SP-700和sephade