大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的對(duì)比研究.pdf

1、目的：
　　探究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或骨髓單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的對(duì)比研究，并進(jìn)一步觀察內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性。
　　方法：
　　獲取SD大鼠股骨及脛骨骨髓細(xì)胞，與培養(yǎng)液混勻后計(jì)數(shù)，并分兩組，A組：將原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞加入含10％FBS的M199培養(yǎng)液中，接種、傳代、純化至第三代，分檢測(cè)組：檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特性；實(shí)驗(yàn)組：在含10%FBS的M199培養(yǎng)液中添加50ng/ml VEGF和10ng/ml bFGF；對(duì)照組：加

2、入含10%FBS的M199培養(yǎng)液。B組：應(yīng)用密度梯度離心法收集單個(gè)核細(xì)胞，分實(shí)驗(yàn)組：在含10%FBS的M199培養(yǎng)液中添加50ng/ml VEGF和10ng/ml bFGF；對(duì)照組：加入含10%FBS的M199培養(yǎng)液。分別檢測(cè)A、B組的①細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)特征，②應(yīng)用CCK8試劑盒檢測(cè)、繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算細(xì)胞群體倍增時(shí)間；③流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面特異性標(biāo)記物 CD31，CD34和vWF；④免疫組織熒光法檢測(cè)vWF。
　　結(jié)果：

3、r>　?、貯組培養(yǎng)24小時(shí)后可見細(xì)胞濃度極大，全為球形的骨髓中的血紅細(xì)胞，如堆積的沙粒狀，懸浮于培養(yǎng)液，多次換液和傳代后發(fā)現(xiàn)懸浮于培養(yǎng)液中的紅細(xì)胞大量減少，并見大量的貼壁細(xì)胞。B組實(shí)驗(yàn)組可見細(xì)胞呈梭形、紡錘形和三角形，其中可見少量的圓形、橢圓形細(xì)胞排列呈線性。繼續(xù)培養(yǎng)可見鋪路石狀生長(zhǎng)。
　?、贐組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線均呈M型，群體倍增時(shí)間約為8天（192小時(shí)），A、B對(duì)照組與A組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線均呈S型，群體倍增時(shí)間約為5天（12

4、0小時(shí)）。
　?、跙實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞表面特異性標(biāo)記物 CD31、CD34、vWF均為陽(yáng)性，而A、B對(duì)照組與A組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞表面特異性標(biāo)記物 CD31、CD34、vWF均為陰性。
　?、蹷實(shí)驗(yàn)組免疫組織熒光染色 vWF陽(yáng)性，A、B對(duì)照組與A組實(shí)驗(yàn)組為免疫組織熒光染色vWF陰性。
　　結(jié)論：
　　SD大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)VEGF和bFGF誘導(dǎo)后可分化為具有血管內(nèi)皮細(xì)胞特征的細(xì)胞。但骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞添加誘導(dǎo)劑后不能分化為具有血