骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實驗研究.pdf

1、血管化和骨再生是骨愈合過程中兩個最基本環(huán)節(jié)，骨組織工程學(xué)的迅速發(fā)展，為骨再生和脊柱融合提供了合乎生物學(xué)原則的思路。當(dāng)前該領(lǐng)域的研究主要集中于種子細(xì)胞的獲取和誘導(dǎo)條件的探索，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)因其具有低免疫原性、多向分化及高增殖潛能而倍受關(guān)注。我們實驗將探討用血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF165)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，為組織工程提供新的種子細(xì)胞、并探討

2、試驗條件。 目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)向血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，為復(fù)雜器官組織工程血管化及細(xì)胞移植修復(fù)損傷組織提供理想的細(xì)胞來源。探討不同濃度的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF165)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響。 方法：1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞取自Wistar大鼠(體重100g左右，三周齡，雌雄不限，中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)。試劑為血管內(nèi)皮生長因子(VEGF165)、兔抗鼠VEGFR1/

3、Flt1抗體、濃縮型免疫組化試劑盒。2采用密度梯度離心法與貼壁分離法相結(jié)合分離、純化大鼠BMSCs，用含10％胎牛血清的L—DMEM培養(yǎng)至第三代作為種子細(xì)胞，對照組A組不加生長因子，實驗組B、C、D、E組分別加入5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml VEGF165，培養(yǎng)24小時后各組間行細(xì)胞增殖比較，14天后終止培養(yǎng)，觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，并對各組行血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR1/Flt1)免疫細(xì)胞

4、化學(xué)染色。 結(jié)果：對于體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，含不同濃度VEGF165的各組培養(yǎng)液對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖作用大小不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。并且含VEGF165的各組培養(yǎng)液與對照組比較，其能夠誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，其誘導(dǎo)后的陽性細(xì)胞比例分別為2.1598±0.2555％、30.3591±5.1687％、44.7643±2.1011％、56.0111±2.9603％、86.2438±0.9663％，差異有統(tǒng)計學(xué)意