骨髓間充質干細胞向血管內皮細胞誘導分化的實驗研究.pdf

1、血管化和骨再生是骨愈合過程中兩個最基本環(huán)節(jié)，骨組織工程學的迅速發(fā)展，為骨再生和脊柱融合提供了合乎生物學原則的思路。當前該領域的研究主要集中于種子細胞的獲取和誘導條件的探索，骨髓間充質干細胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)因其具有低免疫原性、多向分化及高增殖潛能而倍受關注。我們實驗將探討用血管內皮細胞生長因子(VEGF165)誘導骨髓間充質干細胞分化為血管內皮細胞，為組織工程提供新的種子細胞、并探討

2、試驗條件。 目的：研究骨髓間充質干細胞(MSCs)向血管內皮細胞的誘導分化，為復雜器官組織工程血管化及細胞移植修復損傷組織提供理想的細胞來源。探討不同濃度的血管內皮細胞生長因子(VEGF165)對骨髓間充質干細胞增殖及向血管內皮細胞分化的影響。 方法：1.骨髓間充質干細胞取自Wistar大鼠(體重100g左右，三周齡，雌雄不限，中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供)。試劑為血管內皮生長因子(VEGF165)、兔抗鼠VEGFR1/

3、Flt1抗體、濃縮型免疫組化試劑盒。2采用密度梯度離心法與貼壁分離法相結合分離、純化大鼠BMSCs，用含10％胎牛血清的L—DMEM培養(yǎng)至第三代作為種子細胞，對照組A組不加生長因子，實驗組B、C、D、E組分別加入5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml VEGF165，培養(yǎng)24小時后各組間行細胞增殖比較，14天后終止培養(yǎng)，觀察各組細胞形態(tài)學改變，并對各組行血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR1/Flt1)免疫細胞

4、化學染色。 結果：對于體外培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞，含不同濃度VEGF165的各組培養(yǎng)液對骨髓間充質干細胞增殖作用大小不同，差異有統(tǒng)計學意義。并且含VEGF165的各組培養(yǎng)液與對照組比較，其能夠誘導骨髓間充質干細胞向血管內皮細胞分化，其誘導后的陽性細胞比例分別為2.1598±0.2555％、30.3591±5.1687％、44.7643±2.1011％、56.0111±2.9603％、86.2438±0.9663％，差異有統(tǒng)計學意