MG132抑制人晶狀體上皮細(xì)胞增殖、移行和分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)研究蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)HLEC增殖、移行和分化的抑制作用，初步探索MG132防治后發(fā)性白內(nèi)障的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、采用組織塊培養(yǎng)法，對(duì)人晶狀體前囊膜進(jìn)行培養(yǎng)，并利用形態(tài)學(xué)觀察和體外培養(yǎng)HLEC特異性的“晶狀體小體”進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
　　 2、MTT比色法：傳代的HLEC分別加入FGF-2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+FGF-2(FGF-2，10ng

2、/m1；MG132，10μM)并作對(duì)照，培養(yǎng)24h后以MTT法測(cè)定吸光度(OD)值，計(jì)算其增生率。
　　 3、移行能力測(cè)定：傳代的HLEC分別加入FGF-2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+FGF-2(FGF-2，10ng/ml；MG132，10μM)并作對(duì)照，用無(wú)菌棉棒在細(xì)胞層中劃出細(xì)胞裸露區(qū)，培養(yǎng)24h后對(duì)行至裸露區(qū)的細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算移行能力。
　　 4、細(xì)胞免疫組化法：收集傳代的HLEC分別加入

3、TGF-β2(10ng/ml)；MG132(10μM)；MG132+TGF-β2(TGF-β2，10ng/ml；MG132，10μM)并作對(duì)照，培養(yǎng)24h后免疫組化檢測(cè)胞漿中FN的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、HLEC原代培養(yǎng)中，細(xì)胞接種后24h內(nèi)，即有部分上皮細(xì)胞自囊膜片生長(zhǎng)移出，貼壁生長(zhǎng)。長(zhǎng)期培養(yǎng)的HLEC中，可觀察到細(xì)胞呈同心圓環(huán)繞的小球體狀結(jié)構(gòu)，即體外培養(yǎng)LEC特征性的“晶狀體小體”。
　　 2、10n

4、g/mlFGF-2能誘導(dǎo)HLEC增殖24.2％；10μM的MG132能夠有效抑制HLEC增殖，增殖率為-25.4％且能夠有效抑制FGF-2誘導(dǎo)的HLEC增殖，增殖率為-20.1％。MG132+FGF-2組和FGF-2組對(duì)HLEC的作用有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3、10ng/mlFGF-2能誘導(dǎo)HLEC移行，移行能力為33.6％，10μM的MG132能夠強(qiáng)有效地抑制FGF-2誘導(dǎo)HLEC的移行作用。MG132+FGF-

5、2組和FGF-2組對(duì)HLEC的作用有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4、TGF-β2組可見HLEC胞漿中多量黃褐色沉積物；而MG132+TGF-β2組FN的表達(dá)明顯下降，與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異；MG132組接近對(duì)照組。
　　 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)成功地進(jìn)行了HLEC的體外培養(yǎng)，獲得了高純度的HLEC細(xì)胞，可以作為后發(fā)障的細(xì)胞學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。2.無(wú)論FGF-2、TGF-β2存在與否，MG132能強(qiáng)有效抑制HLEC增殖、移