ERK1-2信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的bFGF在人晶狀體上皮細(xì)胞增殖分化中的作用和機(jī)制.pdf

1、 目的：本實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞進(jìn)行分組,設(shè)定在相同劑量的一定時(shí)間內(nèi)用bFGF及ERK信號(hào)通路阻斷劑PD98059刺激后,檢測(cè)各組間的細(xì)胞數(shù)量、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白mRNA及磷酸化ERK的表達(dá)有無(wú)差異及各組之間的趨勢(shì),探討PCO的形成是否在bFGF的介導(dǎo)下通過(guò)ERK途徑參與及相關(guān)機(jī)制。
方法：采用體外原代培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇、傳代及培養(yǎng)。待培養(yǎng)細(xì)胞傳代3-5次,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)良好,覆蓋培養(yǎng)瓶達(dá)70-

2、80%,即達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。加入10ug/L bFGF及特異性阻斷劑PD98059作用一定時(shí)間并根據(jù)作用時(shí)間進(jìn)行分組。MTT法檢測(cè)HLECs數(shù)量及活性；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定HLECs中α-SMA mRNA的表達(dá)；免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)ERK蛋白磷酸化水平。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均在SPSS19.0系統(tǒng)軟件上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
結(jié)果：1. HLECs的數(shù)量在僅加了bFGF組中均增多,細(xì)胞活性增強(qiáng),二組間差異

3、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),作用時(shí)間較長(zhǎng)組,細(xì)胞數(shù)量多于作用短組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；只加bFGF組細(xì)胞數(shù)量明顯多于只加阻斷劑組及空白對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；只加入PD98059組無(wú)論在細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞活性,均低于其他組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在均加入bFGF及PD98059組中,可見(jiàn)阻斷劑作用時(shí)間長(zhǎng)組細(xì)胞數(shù)量及活性低于作用短的組別,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2. b

4、FGF作用劑量不變的情況下,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),可見(jiàn)α-SMA mRNA表達(dá)增加明顯,二組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ；在bFGF作用時(shí)間6小時(shí)后,可見(jiàn)α-SMA mRNA值達(dá)最高,二組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ；加阻斷劑PD98059作用后,α-SMA mRNA表達(dá)減少且隨阻斷劑作用時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)減少,二組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.在bFGF劑量相同的情況下,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),p-er

5、k的表達(dá)量逐漸增多,證明了bFGF的分泌促進(jìn)ERK信號(hào)通路的磷酸化。在空白對(duì)照組非磷酸化的表達(dá)多于磷酸化,作用0.5h以后,磷酸化表達(dá)開(kāi)始多于非磷酸化,1小時(shí)左右磷酸化表達(dá)到達(dá)一個(gè)高峰,到6小時(shí)可見(jiàn)磷酸化與非磷酸化的表達(dá)相差不明顯。
結(jié)論：1. bFGF對(duì)HLECs具有促增殖作用,在低濃度劑量不變的前提下,呈現(xiàn)時(shí)間相關(guān)性。2. bFGF可促進(jìn)HLECs分泌α-SMA,促進(jìn)HLECs分化,并呈現(xiàn)時(shí)間及劑量相關(guān)性。3.bFGF