ERK1-2信號傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的bFGF在人晶狀體上皮細(xì)胞增殖分化中的作用和機(jī)制.pdf

1、 目的：本實驗將培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞進(jìn)行分組,設(shè)定在相同劑量的一定時間內(nèi)用bFGF及ERK信號通路阻斷劑PD98059刺激后,檢測各組間的細(xì)胞數(shù)量、α-平滑肌肌動蛋白mRNA及磷酸化ERK的表達(dá)有無差異及各組之間的趨勢,探討PCO的形成是否在bFGF的介導(dǎo)下通過ERK途徑參與及相關(guān)機(jī)制。
方法：采用體外原代培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇、傳代及培養(yǎng)。待培養(yǎng)細(xì)胞傳代3-5次,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長良好,覆蓋培養(yǎng)瓶達(dá)70-

2、80%,即達(dá)到實驗要求。加入10ug/L bFGF及特異性阻斷劑PD98059作用一定時間并根據(jù)作用時間進(jìn)行分組。MTT法檢測HLECs數(shù)量及活性；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定HLECs中α-SMA mRNA的表達(dá)；免疫印跡實驗(Western blot)檢測ERK蛋白磷酸化水平。所有實驗數(shù)據(jù)均在SPSS19.0系統(tǒng)軟件上進(jìn)行統(tǒng)計。
結(jié)果：1. HLECs的數(shù)量在僅加了bFGF組中均增多,細(xì)胞活性增強(qiáng),二組間差異

3、無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),作用時間較長組,細(xì)胞數(shù)量多于作用短組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；只加bFGF組細(xì)胞數(shù)量明顯多于只加阻斷劑組及空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；只加入PD98059組無論在細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞活性,均低于其他組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在均加入bFGF及PD98059組中,可見阻斷劑作用時間長組細(xì)胞數(shù)量及活性低于作用短的組別,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2. b

4、FGF作用劑量不變的情況下,隨著作用時間的延長,可見α-SMA mRNA表達(dá)增加明顯,二組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) ；在bFGF作用時間6小時后,可見α-SMA mRNA值達(dá)最高,二組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) ；加阻斷劑PD98059作用后,α-SMA mRNA表達(dá)減少且隨阻斷劑作用時間的延長表達(dá)減少,二組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
3.在bFGF劑量相同的情況下,隨著作用時間的延長,p-er

5、k的表達(dá)量逐漸增多,證明了bFGF的分泌促進(jìn)ERK信號通路的磷酸化。在空白對照組非磷酸化的表達(dá)多于磷酸化,作用0.5h以后,磷酸化表達(dá)開始多于非磷酸化,1小時左右磷酸化表達(dá)到達(dá)一個高峰,到6小時可見磷酸化與非磷酸化的表達(dá)相差不明顯。
結(jié)論：1. bFGF對HLECs具有促增殖作用,在低濃度劑量不變的前提下,呈現(xiàn)時間相關(guān)性。2. bFGF可促進(jìn)HLECs分泌α-SMA,促進(jìn)HLECs分化,并呈現(xiàn)時間及劑量相關(guān)性。3.bFGF