SHR心肌細(xì)胞凋亡、心肌纖維化及膠原基因表達(dá)的研究.pdf

1、研究目的:該實(shí)驗(yàn)應(yīng)用與人類原發(fā)性高血壓最接近的動(dòng)物模型——自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,觀察高血壓不同階段心肌纖維化、凋亡與增生的動(dòng)態(tài)演變過程,觀察LVH不同階段Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá),二者與心肌纖維化的關(guān)系,為闡明高血壓左室重構(gòu)的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)資料.研究方法:12周齡SHR雄性70只,隨機(jī)分為對(duì)照組28只、治療組依那普利組和洛沙但組備21只,分別予以依那普利和洛沙但30mg.kg<'-1>.day<'-1>同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組WKY組

2、亦為12周齡,共觀察12周.SHR對(duì)照組和治療組分別于12、16、20、24周,WKY組分別于12、24周4﹪戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉,取出心臟和胸主動(dòng)脈(主動(dòng)脈弓至隔肌)固定,光鏡下HE、Sirius紅染色,電鏡下構(gòu)(木緣)酸 鉛染色,測(cè)量左心室重量,計(jì)算左室重量/體重(LV/BW),測(cè)量心肌問質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA ),測(cè)量血管壁厚度、管壁內(nèi)、外徑;原位未端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測(cè)凋亡細(xì)胞;SP法

3、檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA);另取左心室心肌組織及主動(dòng)脈進(jìn)行勻漿,采用以β- actin為內(nèi)參照的RT- PCR法測(cè)定不同周齡SHR及WKY大鼠左室心肌、主動(dòng)脈Ⅰ、Ⅲ型膠原基因mRNA的表達(dá).結(jié)論:(1)自12至24周齡S HR(即高血壓左室肥厚早、中、晚期)心臟肥厚指數(shù)和心肌間質(zhì)纖維化逐漸增加,SHR組明顯高于WKY組.心肌纖維化從心室肥厚的早期就開始,表明心肌間質(zhì)纖維化參與了SHR左室重構(gòu).應(yīng)用依那普利和洛沙但治療后,LVH和心肌

4、纖維化明顯下降,兩組間比較無差異,證實(shí)ACEI和AngⅡAT<,1>受體桔抗劑均能抑制心肌膠原增生,早期應(yīng)用能逆轉(zhuǎn)左室肥厚.(2)高血壓心肌細(xì)胞中存在細(xì)胞凋亡,且細(xì)胞凋亡存在時(shí)間窗,12周齡時(shí)細(xì)胞凋亡接近正常對(duì)照組,以后凋亡增加,至20周齡時(shí),細(xì)胞凋亡到達(dá)最高峰,至24周凋亡明顯減少,表明細(xì)胞凋亡參與了高血壓左室重構(gòu).(3)心肌Ⅰ型膠原基因表達(dá)隨年齡而增加,SHR更顯著.(4)SHR主動(dòng)脈重構(gòu)呈現(xiàn)血管肥厚的特點(diǎn),即內(nèi)、外徑不變,管壁增厚