綠茶通過調控肺組織微環(huán)境實現大鼠肺癌預防作用的蛋白質組學研究.pdf

1、目的：目前肺癌已成為全球發(fā)病率、病死率最高的惡性腫瘤。近年來，盡管肺癌綜合治療技術不斷發(fā)展，但其總體療效卻仍然很不理想。人們轉而注重肺癌的預防，希望通過化學預防策略降低肺癌的發(fā)生風險。綠茶為美國國立癌癥研究所推薦的有效化學預防策略之一。在前期研究中，課題組采用苯并芘油劑大鼠肺內注射成功構建了大鼠原發(fā)肺腫瘤模型，發(fā)現飲用1％的綠茶能使苯并芘所致的大鼠原發(fā)肺腫瘤發(fā)生率從70％下降至30％，并且綠茶對經苯并芘油劑肺內注射處理后大鼠肺組織微環(huán)境

2、中的粘膜上皮細胞、粘膜下細胞、淋巴細胞、血管內皮細胞以及肺間質細胞等的基因表達具有明顯的調節(jié)作用，提示綠茶很可能在支氣管/肺泡上皮細胞因DNA受損而進入癌變的過程中，通過調節(jié)異常上皮周圍的肺組織微環(huán)境，增強肺組織微環(huán)境對異常上皮細胞的抑制、甚至逆轉作用，來實現延緩或阻斷肺癌的發(fā)生。 方法：實驗第一部分，將80只SD大鼠隨機分為兩組。A組40只大鼠接受3，4.苯并芘.玉米油肺內注射，而B組大鼠僅接受玉米油肺內注射。兩組大鼠均接受每

3、2周一次，一共4次肺內注射。在首次注射32周后處死所有大鼠，將A組中發(fā)生肺腫瘤的大鼠分入CA亞組，而未生成肺腫瘤的大鼠分入NON-CA亞組。提取NON-CA組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內注射部位周圍肺組織，以及CA組大鼠肺腫瘤旁肺組織的總蛋白，經丙酮純化后，配對進行雙向凝膠電泳分離，獲得NON-CA/CA組肺組織微環(huán)境總蛋白2-DE圖譜，并分析獲得差異表達蛋白質點，即肺癌發(fā)生過程中，大鼠肺組織微環(huán)境防癌作用相關蛋白質點。實驗第二部分，

4、將60只SD大鼠隨機分為兩組。TEA組30只大鼠接受綠茶干預，而WATER組30只大鼠接受水為飲料的對照干預。所有大鼠均接受如前所述的3，4-苯并芘.玉米油肺內注射，每2周一次，一共4次。分別于首次注射后的第4周、第8周、第16周處死兩組大鼠各9只。提取TEA組和WATER組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內注射部位周圍肺組織的總蛋白，經丙酮純化后，配對進行雙向凝膠電泳分離，獲得TEA-4w/WATER-4w組、TEA-8w/WATER-8

5、w組、TEA-16w/WATER-16w組肺組織微環(huán)境總蛋白2-DE圖譜，并分析獲得差異表達蛋白質點，即肺癌發(fā)生過程中，不同時段綠茶調控的肺組織微環(huán)境敏感蛋白質點。實驗第三部分，將前兩部分所獲得的差異表達蛋白質點進行綜合分析，篩選兩部分共同存在的差異表達蛋白質點，通過質譜分析及生物信息學研究鑒定這些蛋白質點所代表的蛋白質，即綠茶調控大鼠肺組織微環(huán)境實現肺癌預防作用的功能蛋白質。 結果：成功構建SD大鼠原發(fā)肺腫瘤模型。成功提取NO

6、N-CA組大鼠3，4-苯并芘.玉米油肺內注射部位周圍肺組織，以及CA組大鼠肺腫瘤旁肺組織的總蛋白。雙向凝膠電泳分離后，經考染顯色獲得背景清晰，分辨率高，重復性好的2-DE圖譜。使用PDQuest軟件對凝膠圖譜進行圖像分析及成組比較，NON-CA/CA組有9個點上調(包括2、4、6、8、9點，見圖1-7)，11個點下調(包括1、3、5、7點，見圖1-7)。成功提取TEA-4w組、WATER-4w組，TEA-8w組、WATER-8w組，TE

7、A-16w組、WATER-16w組大鼠3，4-苯并芘-玉米油肺內注射部位周圍肺組織的總蛋白。雙向凝膠電泳分離后，經考染顯色獲得背景清晰，分辨率高，重復性好的2-DE圖譜。使用PDQuest軟件對凝膠圖譜進行圖像分析及成組比較，TEA-4w/WATER-4w組，TEA-8w/WATER-8w組，TEA-16w/WATER-16w組共有的表達上調點有8個(包括2、4、6、8、9點，見圖2-7，2-8，2-9)，而共有的表達下調點有7個(包括

8、1、3、5、7點，見圖2-7，2-8，2-9)。綜合前兩部分實驗結果，分析獲取9個共同的表達差異蛋白質點，經質譜分析及生物信息學研究鑒定有8個蛋白得到鑒定，1個蛋白可疑。8個得到鑒定的差異表達蛋白質分別為：DJ-1，CapZ alpha-2，CK-7，LRRGT00191，GDI-2，EF-1-alpha，Guanase，以及GST A3。 結論：利用3，4.苯并芘.玉米油混合液經皮肺內注射可成功構建大鼠原發(fā)肺腫瘤模型。綠茶在3