黃芪注射液和黃芪甲苷對大鼠腦出血后出血灶周圍凋亡神經(jīng)元的作用研究.pdf

1、目的：觀察黃芪注射液和黃芪甲苷對大鼠腦出血后出血灶周圍神經(jīng)元凋亡的作用，探討腦出血后神經(jīng)元凋亡的規(guī)律及可能的凋亡通路，以期為黃芪注射液以及黃芪甲苷應(yīng)用于臨床腦出血的治療提供理論依據(jù)和實驗依據(jù)。
　　方法：清潔級健康成年SD大鼠140只，雌雄不限，體重300±50 g。大鼠隨機分為正常組（n=20）、模型組（n=40）和治療組（n=80）。模型組分為3 d模型組（n=20）和7 d模型組（n=20）；治療組分為黃芪注射液3 d治療組

2、（n=20）、黃芪注射液7 d治療組（n=20）、黃芪甲苷3 d治療組（n=20）、黃芪甲苷7 d治療組（n=20）。應(yīng)用腦立體定位儀于大鼠尾殼核注入肝素化VII型膠原酶建立腦出血模型。治療組大鼠于腦出血模型制作成功后6 h開始腹腔注射黃芪注射液或黃芪甲苷進行干預(yù)，繼之每隔24 h注射一次。模型組每日經(jīng)腹腔注入相應(yīng)量的生理鹽水。分別對各組大鼠進行神經(jīng)行為學(xué)評分，尼氏染色，吉姆薩（Giemsa）染色，免疫組織化學(xué)染色，腦組織含水量測定及蛋

3、白免疫印跡（Western Blot）等實驗觀察。
　　結(jié)果：①大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分：黃芪注射液治療組和黃芪甲苷治療組均能有效降低腦出血大鼠的神經(jīng)功能缺損評分（P<0.05）；黃芪注射液和黃芪甲苷治療腦出血大鼠7 d時其神經(jīng)行為學(xué)改善情況要優(yōu)于相應(yīng)的3 d治療組（P<0.05）。②大鼠腦出血后腦組織含水量：大鼠腦出血后各模型組腦組織含水量較正常組明顯增加（P<0.05）；黃芪注射液及黃芪甲苷各時間段治療組大鼠腦組織含水量與其相應(yīng)的模

4、型組比較均明顯減?。≒<0.05）；黃芪注射液各治療組大鼠腦組織含水量與黃芪甲苷治療組比較均明顯減?。≒<0.05）；7 d黃芪注射液治療組及7 d黃芪甲苷治療組大鼠腦組織含水量與各自的3 d治療組比較均明顯減?。≒<0.05）；黃芪注射液7 d治療組大鼠腦含水量已接近正常大鼠腦組織含水量。③大鼠腦組織尼氏染色：正常神經(jīng)元尼氏體較大、數(shù)量較多、染色較深，病變輕的神經(jīng)元尼氏體變小、數(shù)量變少、染色淺淡，病變較重的神經(jīng)元尼氏體數(shù)量更少。④大鼠

5、腦組織Giemsa染色：各治療組腦出血灶周圍神經(jīng)元凋亡數(shù)量及程度均較模型組降低。⑤大鼠腦組織免疫組化染色：Bcl-2、Bax及Caspase-3在正常腦組織中僅有少量表達，并且 Bcl-2/ Bax的值接近于1。與相應(yīng)模型組比較，各藥物治療組 Bcl-2的陽性表達均明顯升高（P<0.05），而Bax及Caspase-3的陽性表達均顯著降低（P<0.05）。與3 d黃芪甲苷治療組相比，3 d黃芪注射液治療組Bcl-2的陽性表達明顯升高（P

6、<0.05）， Bax及Caspase-3的陽性表達明顯降低（P<0.05）。與7 d黃芪甲苷治療組相比，7 d黃芪注射液治療組Bcl-2的陽性表達明顯升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的陽性表達明顯降低（P<0.05）。與3 d黃芪注射液治療組相比，7 d黃芪注射液治療組Bcl-2的陽性表達明顯升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的陽性表達明顯降低（P<0.05）。與3 d黃芪甲苷治療組相比，7 d黃芪甲苷治

7、療組Bcl-2的陽性表達明顯升高（P<0.05），Bax及Caspase-3的陽性表達明顯降低（P<0.05）。⑥大鼠腦組織蛋白免疫印跡：正常組大鼠腦組織內(nèi)Bax、Bcl-2以及Caspase-3均有少量表達。與正常組相比，各模型組大鼠腦組織內(nèi)Bax、Bcl-2和Caspase-3的表達均有不同程度的增加（P<0.05），尤以Bax和Caspase-3表達增加明顯。與相應(yīng)模型組比較，各藥物治療組Bcl-2蛋白的表達均明顯增加（P<0.0

8、5），同時伴隨Bax和Caspase-3蛋白的表達均明顯減少（P<0.05）。各藥物7 d治療組與相應(yīng)3 d治療組Bcl-2蛋白的表達增加更為明顯（P<0.05），同時Bax和Caspase-3蛋白的表達明顯減少（P<0.05）。黃芪注射液各時間段治療組Bcl-2蛋白的表達與黃芪甲苷各時間段治療組相比明顯增加（P<0.05），同時伴隨Bax和Caspase-3蛋白的表達明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：①黃芪注射液和黃芪甲苷均