黃芪注射液對缺氧缺糖-復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩97頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、第一部分
   黃芪注射液對缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元Caspase-表達(dá)的影響
   目的:觀察黃芪注射液對缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因Caspase-3表達(dá)的影響。
   方法:取原代培養(yǎng)8d的大鼠海馬神經(jīng)元,隨機分為4組:正常對照組、黃芪注射液溶劑對照組、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組和黃芪注射液組。除正常對照組外均進(jìn)行缺氧缺糖0.5h再復(fù)氧復(fù)糖,各組于復(fù)氧復(fù)糖后0h、0.5h、2h、6h、24

2、h、48h、72h和120h采用免疫組織化學(xué)染色法和蛋白免疫印跡(western blotting)法檢測海馬神經(jīng)元Caspase-3蛋白的表達(dá),并采用原位雜交和RT-PCR方法檢測海馬神經(jīng)元Caspase-3 mRNA的表達(dá)。
   結(jié)果:免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:正常對照組大鼠海馬神經(jīng)元核規(guī)整,細(xì)胞突起明顯,有少許細(xì)胞胞漿黃染。缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組大鼠海馬神經(jīng)元核皺縮、突起回縮,大量細(xì)胞胞漿黃染,胞核內(nèi)有黃色顆粒,陰性對照組未見

3、胞漿和突起黃染的陽性神經(jīng)元。黃芪注射液溶劑對照組海馬神經(jīng)元亦可見到明顯的核皺縮、突起回縮和胞漿黃染,海馬Caspase-3陽性神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的變化與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相一致。黃芪注射液組大鼠海馬神經(jīng)元有輕微核皺縮,可見部分神經(jīng)元胞漿黃染。隨著復(fù)氧復(fù)糖時間的延長,缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組、黃芪注射液溶劑對照組及黃芪注射液組均可見到陽性神經(jīng)元胞核中黃色顆粒逐漸增多,于24h達(dá)到高峰。與正常對照組相比,除0h和0.5h之外,缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組在

4、2h、6h、24h、48h、72h和120h各時間點海馬Caspase-3陽性神經(jīng)元數(shù)目、占神經(jīng)元總數(shù)的百分率及平均光密度值均明顯增多(P<0.05),于24h達(dá)到高峰。黃芪注射液溶劑對照組以上各個指標(biāo)的變化趨勢均與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相一致(P>0.05)。除0h和0.5h之外,黃芪注射液組各時間點陽性神經(jīng)元數(shù)目、占神經(jīng)元總數(shù)的百分率及平均光密度值均比缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組顯著減少(P<0.05)。原位雜交檢測結(jié)果顯示:Caspase-

5、3 mRNA陽性神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)目、占神經(jīng)元總數(shù)的百分率及平均光密度值的變化趨勢與Caspase-3蛋白的變化趨勢完全一致。Western blotting結(jié)果顯示:除0h和0.5h外,各時間點缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組海馬神經(jīng)元Caspase-3蛋白的平均灰度值均較正常對照組明顯增加(P<0.05),復(fù)氧復(fù)糖24h平均灰度值最高;與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組各時間點Caspase-3蛋白的平均灰度值無明顯變化(P>0.05

6、),而黃芪注射液組除0h和0.5h外,在各個時間點Caspase-3蛋白的平均灰度值明顯降低(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示:除0h和0.5h外,各時間點缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組海馬神經(jīng)元Caspase-3 mRNA的平均光密度值均較正常對照組明顯增加(P<0.05),24h平均光密度值最高;與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組各時間點Caspase-3 mRNA的平均光密度值無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組在除

7、0h和0.5h外的各個時間點Caspase-3 mRNA的平均光密度值均明顯降低(P<0.05)。
   小結(jié):黃芪注射液可抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因Caspase-3的表達(dá),從而抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。
   第二部分
   JNK抑制劑對缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元Caspase-3表達(dá)的影響
   目的:觀察JNK抑制劑(SP600125)對凋亡相關(guān)基因

8、Caspase-3表達(dá)的影響。
   方法:取原代培養(yǎng)8d的大鼠海馬神經(jīng)元,隨機分為7組:正常對照組、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組、黃芪注射液溶劑對照組、黃芪注射液組、DMSO組(二甲基亞砜組即SP600125溶劑組)、SP600125組、SP600125+黃芪注射液組。除正常對照組外,其余各組進(jìn)行缺氧缺糖0.5h再復(fù)氧復(fù)糖,并于復(fù)氧復(fù)糖后6h、24h、72h采用蛋白免疫印跡和RT-PCR方法檢測海馬神經(jīng)元Caspase-3的表達(dá)。

9、r>   結(jié)果:Western blotting結(jié)果顯示:缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組在6h、24h、72h海馬神經(jīng)元Caspase-3蛋白平均灰度值均較正常對照組明顯增加(P<0.05);與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組、DMSO組各時間點Caspase-3蛋白平均灰度值無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組、SP600125組、SP600125+黃芪注射液組在各個時間點Caspase-3蛋白平均灰度值均明顯降低(P<0

10、.05),但此三組之間無明顯差別(P>0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示:缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組在6h、24h、72h海馬神經(jīng)元Caspase-3mRNA平均光密度值均較正常對照組明顯增加(P<0.05);與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組、DMSO組各時間點Caspase-3mRNA平均光密度值無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組、SP600125組、SP600125+黃芪注射液組在各個時間點Caspase-3mRNA

11、平均光密度值均明顯降低(P<0.05),但此三組之間無明顯差別(P<0.05)。
   小結(jié):黃芪注射液可通過抑制JNK3信號通路的激活而減少Caspase-3的表達(dá),從而抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。
   第三部分
   黃芪注射液抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的作用機制
   目的:探討黃芪注射液對缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖致大鼠海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白(CaM)的表達(dá)、超氧化物歧化酶(S

12、OD)活性和丙二醛(MDA)含量的影響。
   方法:取原代培養(yǎng)8d的大鼠海馬神經(jīng)元,隨機分為4組:正常對照組、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組、黃芪注射液溶劑對照組和黃芪注射液組。除正常對照組外均進(jìn)行缺氧缺糖0.5h再復(fù)氧復(fù)糖,各組于復(fù)氧復(fù)糖后0h、0.5h、2h、6h、24h、48h、72h和120h采用蛋白免疫印跡和RT-PCR法檢測海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白(CaM)及CaM mRNA的表達(dá),并用黃嘌呤氧化酶法測定各組海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)超氧化物

13、歧化酶(SOD)的活性,用TBA比色法檢測丙二醛(MDA)的含量。
   結(jié)果:western blotting結(jié)果顯示:復(fù)氧復(fù)糖后0h、0.5h、2h、6h、24h、48h、72h和120h各時間點缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組海馬神經(jīng)元CaM蛋白表達(dá)條帶平均灰度值均較正常對照組明顯升高(P<0.05);與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組各時間點CaM蛋白的平均灰度值無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組在各個時間點C

14、aM蛋白的平均灰度值明顯降低(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示:各時間點缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組海馬神經(jīng)元CaM mRNA的平均光密度值均較正常對照組明顯降低(P<0.05);與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組各時間點CaMmRNA的平均光密度值無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組在各個時間點CaM mRNA的平均光密度值明顯升高(P<0.05)。SOD活性和MDA含量檢測結(jié)果顯示:各時間點缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組海馬神

15、經(jīng)元SOD活性均較正常對照組明顯降低(P<0.05),MDA含量明顯升高(P<0.05);與缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組相比,黃芪注射液溶劑對照組各時間點SOD的活性、MDA含量無明顯變化(P>0.05),而黃芪注射液組在各個時間點SOD的活性明顯升高(P<0.05),MDA含量明顯降低(P<0.05)。
   小結(jié):黃芪注射液可抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元自由基的生成與釋放,抑制鈣超載,從而抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元

16、的凋亡。
   結(jié)論:
   1黃芪注射液可抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因Caspase-3的表達(dá),從而抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。
   2黃芪注射液可通過抑制JNK3信號通路的激活而減少Caspase-3的表達(dá),從而抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。
   3黃芪注射液能夠升高海馬神經(jīng)元缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖后SOD活力、降低MDA含量,抑制自由基的生成與釋放,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論