FAP-α在膠質(zhì)瘤中的表達及siRNA下調(diào)期表達對膠質(zhì)瘤細胞U87增殖的影響.pdf

1、目的:探討成纖維細胞激活蛋白α(Fibroblast activation proteinα，F(xiàn)AP-α)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達，分析其與臨床病理學特征和預后的關系;研究小片段干擾RNA(siRNA)靶向下調(diào)FAP-α表達對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U87增殖的影響。
　　方法:
　　(1)應用免疫組化染色檢測33例膠質(zhì)瘤和7例正常腦組織中FAP-α蛋白的表達，免疫細胞化學染色和western blot法檢測U87和U251膠質(zhì)瘤細胞

2、株中的表達，并結合臨床病理資料進行分析。同時對所有病例進行隨訪，分析FAP-α表達與預后的關系。
　　(2)通過脂質(zhì)體將小片段干擾RNA轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細胞U87（免疫細胞化學染色和western blot法顯示U87細胞FAP-α的表達水平高于U251），使用westernblot法檢測FAP-α的蛋白表達變化，同時檢測Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達變化，使用Real-time PCR法檢測FAP-α和增殖核抗原(PCNA

3、)的mRNA水平，CCK8法評價轉(zhuǎn)染后U87細胞的增殖能力。
　　結果:
　　(1)低級別膠質(zhì)瘤和高級別膠質(zhì)瘤之間FAP-α蛋白的IOD值差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);FAP-α的表達水平與膠質(zhì)瘤病理級別正相關(r=0.673，P＜0.01);7例正常腦組織FAP-α蛋白不表達或表達弱陽性，與低級別膠質(zhì)瘤（P＜0.05）和高級別膠質(zhì)瘤（P＜0.01)存在統(tǒng)計學差異;在U251和U87膠質(zhì)瘤細胞上存在不同程度的表達，其中U

4、87的表達水平較高;FAP-α的表達強度與病人性別、腫瘤大小、年齡以及手術切除程度并無明顯聯(lián)系（P均＞0.05），生存分析顯示低FAP-α組和高FAP-α組兩者生存率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），F(xiàn)AP-α的表達是影響膠質(zhì)瘤患者預后的獨立因素（P=0.038）。同時檢索REMBRANDT數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)FAPmRNA低表達組預后明顯好于高表達組（P＜0.01）。
　　(2)①轉(zhuǎn)染48h后，siRNA組FAP-α mRNA和蛋白的表

5、達明顯低于NC組和Blank組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01); siRNA組較NC組caspase-3蛋白表達增加（P＜0.05);Bcl-2蛋白表達明顯降低（P＜0.01)，siRNA組較NC組PCNA mRNA表達水平明顯下降（P＜0.01)。②轉(zhuǎn)染后48h、72h、96h siRNA組U87細胞吸光度值低于NC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　結論:FAP-α在腦膠質(zhì)瘤和膠質(zhì)瘤細胞株U251和U87中存在表達，