ATM-ATR阻滯劑對膠質瘤U87化療敏感性的研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探索ATM/ATR阻滯劑對膠質瘤U87細胞化療后細胞增殖、凋亡、細胞周期及修復通路的影響，尋求提高膠質瘤細胞化療敏感性的靶點。
　　方法:
　　一、細胞培養(yǎng)
　　將U87細胞復蘇后重懸于含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5％C02的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2-3天換液一次，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。
　　二、實驗分組
　　實驗分為四個組，分別為空白組，替

2、莫唑胺單藥組，替莫唑胺+KU55933組，替莫唑胺+咖啡因組。替莫唑胺作用時間分別為24h，48h，72h。KU55933及咖啡因分別于替莫唑胺前1h加入。
　　三、CCK-8法檢測細胞增殖活性
　　根據(jù)既往文獻及研究結果，確定替莫唑胺終濃度為50ug/ml，KU55933終濃度為10uM，咖啡因終濃度為100uM。按實驗分組進行相關藥物作用后，應用CCK-8法檢測不同藥物作用后細胞的存活率。
　　四、Annex in

3、Ⅴ/PI雙染流失細胞術檢測細胞凋亡率
　　根據(jù)流式細胞術原理，將待測U87細胞以1×106個/ml接種，按實驗分組進行干預，收集細胞，按照流式凋亡試劑盒處理細胞。檢測U87細胞凋亡情況。
　　五、Wesstern Blot檢測相關蛋白表達
　　分析利用儲存-80℃冰箱中的細胞蛋白做Western blot，測定chk1，chk2，chk1，chk2，cyclinB，cyclinD1，cleaved-caspase3蛋白

4、的表達情況。
　　結果:
　　1、替莫唑胺組細胞增殖活度較空白組明顯降低，替莫唑胺+KU55933組，替莫唑胺+咖啡因組較替莫唑胺組細胞增殖活度進一步降低，結果有統(tǒng)計學意義。
　　2、替莫唑胺單藥組較空白組總chk蛋白表達不變，磷酸化chk升高，cyclinB和cyclinD1表達上調，cleaved-caspase3表達上調，結果有統(tǒng)計學意義。
　　3、替莫唑胺+KU55933組，替莫唑胺+咖啡因組較替莫唑胺組