ppGalNAcT2的活性與釩的關(guān)系及其與偏釩酸鈉聯(lián)合對HL-60細胞的影響.pdf

1、目的：有文獻報道釩化合物通過影響多種酶的活性，從而具有了抗癌的作用。本文旨在研究四聚釩酸鹽VO3（分子式O13V4）對糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAcT2活性的影響，及釩的抗腫瘤作用是否與糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAcT2相關(guān)。通過向HL-60細胞加入不同濃度的偏釩酸鈉及抑制ppGalNAcT2的表達，觀察HL-60細胞增殖和細胞之間粘附性的改變，初步判斷釩抗腫瘤作用與ppGalNAc—T2的相關(guān)性。 方法：用分子動力學(xué)模擬軟件包對ppG

2、alNAcT2進行分子動力學(xué)模擬。分子對接軟件把VO3與ppGalNAcT2的活性中心進行分子對接，并進對對接產(chǎn)物進行分子動力學(xué)模擬以進一步驗證分子對接的結(jié)果。在人急性粒細胞白血病細胞株HL-60中加入不同濃度的偏釩酸鈉，MTT比色法觀察對細胞生長的影響，半定量RT—PCR法檢測在不同濃度偏釩酸鈉作用下ppGalNAcT2在mRNA水平的表達。為了進一步研究釩影響HL-60細胞增殖是否與ppGalNAc—T2相關(guān)，對HL-60細胞瞬時轉(zhuǎn)

3、染ppGalNAc—T2 RNA干擾載體，觀察抑制ppGalNAc—T2的表達對釩影響的HL-60細胞增殖和粘附產(chǎn)生的改變。 結(jié)果：對ppGalNAcT2進行了分子動力學(xué)模擬，識別出了影響酶活性的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域loopB。將VO3與ppGalNAc—T2進行了成功對接，發(fā)現(xiàn)VO3可能抑制ppGalNAc—T2的活性。此外針對HL-60細胞加入不同濃度的偏釩酸鈉，發(fā)現(xiàn)低濃度釩促進細胞增殖，高濃度釩抑制細胞生長并且不同劑量的偏釩酸鈉影響

4、了ppGalNAc—T2在mRNA水平的表達。并對細胞的黏附性產(chǎn)生了影響。瞬時轉(zhuǎn)染ppGalNAc—T2RNA干擾載體發(fā)現(xiàn)抑制ppGalNAc—T2的表達促使HL-60亞細胞的生長增殖受到抑制；且無論是在偏釩酸鈉高濃度還是低濃度，HL-60細胞的生長率均降低；推測抑制ppGalNAc—T2在蛋白水平的表達可以有效促進釩誘導(dǎo)的HL-60細胞凋亡，同時還觀察到抑制ppGalNAc—T2在蛋白水平的表達影響了在一定濃度偏釩酸鈉作用下HL-60