DATS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞ROS產(chǎn)生及其對(duì)細(xì)胞損傷作用.pdf

1、目的：探討二烯丙基三硫(diallyl trisulfide，DATS)誘導(dǎo)人急性髓性白血病細(xì)胞（HL-60細(xì)胞）活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生及其對(duì)細(xì)胞損傷的作用。 方法：以濃度為50、100、150、200μM的DATS處理HL-60細(xì)胞0、1、3、6、12、24h；或用NADPH氧化酶特異性阻斷劑加拿大麻素（Apocynin）或抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cyst

2、eine，NAC）預(yù)孵育HL-60細(xì)胞30min后，再用150μM 的DATS處理0、1、3、6、12、24h，收集細(xì)胞用于下列分析。細(xì)胞流式檢測(cè)HL-60細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，NBT還原實(shí)驗(yàn)分析NADPH 氧化酶活性，丫啶橙（AO）/溴化乙錠（EB）熒光染色觀察細(xì)胞凋亡情況，細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)膜氧化產(chǎn)物丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）與細(xì)胞蛋白氧化產(chǎn)物羰基化蛋白（Protein Carbon

3、yl）。 結(jié)果：不同濃度DATS處理HL-60細(xì)胞不同時(shí)間后，細(xì)胞流式檢測(cè)顯示ROS的產(chǎn)生與DATS處理呈時(shí)間劑量依賴關(guān)系，在1、3h 隨著DATS處理時(shí)間和濃度的升高而升高，ROS的熒光強(qiáng)度在3h、150μM時(shí)達(dá)到最高峰，值為63.1±0.120，其后維持在一個(gè)較高水平。細(xì)胞凋亡率在各濃度3-6h之間有一個(gè)明顯的上升趨勢(shì)，12h后趨于平穩(wěn)。應(yīng)用Apocynin或是抗氧化劑NAC后，可顯著的降低HL-60細(xì)胞ROS的產(chǎn)生和凋亡。

4、HL-60細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化和羰基化蛋白濃度與DATS誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生的趨勢(shì)基本一致，都在3h、150μM處理點(diǎn)達(dá)到最高值，分別為2.711±0.065 nmol/mg、10.813±0.586 nmol/mg。 結(jié)論： 1. DATS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞產(chǎn)生ROS，NADPH氧化酶是DATS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞ROS產(chǎn)生的主要酶系。 2. DATS誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS能介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 3. DATS誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS